用10×濃縮液配制培養基2

UPW培養基10×濃縮液谷氨酰胺牛血清抗生素青霉素鏈霉素

NaOH

吸液管

1. 將血清和谷氨酰胺解凍，置于超凈工作臺內。

2. 所有曾放入水浴鍋的瓶子都要擦干凈后再放人超凈臺。

3. 加入上述“無菌溶液”所列成分。

4 . 加人 1 mol/L NaOH ，使 pH 達到 7.2 (20°C ) , 孵育之后培養基的 pH 將上升至 7.4 (37°C ) 但如果是第 1 次使用的配方，這個數值可能還需要通過滴定試驗來檢驗。

(a) 在 5 個培養皿中分別加入 5 ml 培養基。

(b) 每個培養皿中分別加人 5~50 μl 不同量的 1 mol/L NaOH 。

(c) 置于 5% CO₂ 溫箱中孵育至少 2 h ，最好過夜。

如果需要加人其他成分，而這些成分是用水配制的，，則加入前應先從已準備好的水中取出相同體積的水；如果這些成分溶解在等滲鹽溶液中，則只要加入至終體積。因為血清是等滲的，所以血清也是加人至終體積，盡管這樣做會稀釋培養基的營養成分。

在37°C 時要不斷地平衡和檢測pH , 隨著溫度的升高，CO₂ 的溶解度會降低，HEPES 的 pKa 也會發生變化。