實驗概要
本實驗制備了電感受態大腸桿菌TGl細胞。
主要試劑
1. 基本培養瓊脂板[10.5g K2HPO4、4.5gKH2PO4、1g(NH4)2SO4、0.5g Na3C6H5O72H2O、15g瓊脂加水至1L。高壓滅菌，冷卻至錐形瓶微溫；接著加入lml lmol/L MgSO4、0.5ml 1%維生素B：(硫胺)和10m120%右旋糖。
2. 2×Y培養基(將16g細菌培養用胰蛋白胨、10g酵母、5g NaCl加入到去離子水中并高壓滅菌)。
3. lmol/L Hepes，(N-[2-羥乙基]哌嗪-N’-[2-乙烷磺酸])，pH7.4
4. lmol/L Hepes，pH7.4，10%甘油
5. 10%甘油
主要設備
1. 37℃孵育箱(NewBrunswickScientmc)
2. Sorvatl RC5離心機(或同類型)，GS3轉頭(均在4℃預冷)
3. 預冷的500m1聚丙烯離心管
4. 2L有擋板錐形瓶
實驗材料
大腸桿菌TGl菌株(Stratagen)
實驗步驟
1．將大腸桿菌TG1種到基本培養瓊脂板，37℃過夜。
2．將基本培養瓊脂板上的大腸桿菌TGl再接種到含有15m1 2XTY培養基的100ml形瓶中。37℃振蕩培養過夜。
3．用5ml夜培養的TGl接種到兩個含500m1 2×Y培養基的2L有擋板錐形瓶中。在搖床中培養約1.5小時，直到A600接近0.5。
4．將菌液轉移4個預冷離心瓶中(約250ml/瓶)。平衡后，置于冰上20分鐘。
5．以3000g，4℃離心15分鐘。使用前預冷所有轉頭。
6，棄去上清，并以起始體積的冰冷lmmol/L Hepes溶液(約250m1)重懸每個錐形瓶中的細胞。所有溶液都應當新鮮配置。
7．再次以3000g，4℃離心15分鐘。
8．以一半起始體積的冰冷lmmol/L Hepes溶液(約125ml)重懸每個錐形瓶中的細胞；此時可合并到兩個離心瓶中。
9．再次以3000g，4℃離心15分鐘。
10．以總體積為20m1的10%甘油和lmm01/L Hepes混合液重懸所有細胞。
11．再次以3000g，4℃離心15分鐘。
12．如果細胞不是新鮮使用而是儲存，則需準備乙醇/干冰浴。
13．以總體積為2m1的10%甘油重懸細胞。
14．使用新鮮制備的細胞，或者用干冰浴等量分裝凍存細胞。在檢測效率后，及時使用細胞(在1周內)。
注意事項
1. 用于電轉化的DNA不得含有鹽分。細菌/DNA混合物中如有鹽分可導致電弧(一種短路)的形成，應加以避免。
2. 在70℃10分鐘的熱滅活步驟后，可使用2/Il標準連接液進行連接。
3. 為構建抗體文庫，所用DNA必須使用酚/氯仿抽提以及乙醇沉淀法或選擇合適的試劑盒(例如Geneclean或Qiagen)進行純化。