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  • 發布時間:2020-08-17 13:59 原文鏈接: 電泳分離的蛋白質肽譜和序列分析實驗

    實驗材料 凍干的純化蛋白樣品

    試劑、試劑盒 甲酸氫溴酸過氧化氫NaOH 固體

    儀器、耗材 旋轉蒸發器小試管

    實驗步驟

    1.加入 100ul 過氧化氫到 900ul 甲酸中,在室溫下放置讓,將反應產生過甲酸 (HCOOOH)。


    2.在冰上冷凍過甲酸至 0°C。


    3.在預冷的小試管中,將蛋白質溶解于 50ul 過甲酸中(500ug/ml)。


    4.蓋上帽子,0°C 孵育混合物 4 h。如果蛋白質不溶,把反應延長到 20 h。


    5.加入 30ul 氫溴酸,去除多余的過甲酸。


    要特別小心,可能會釋放出來少量的溴。


    6.用旋轉蒸發器或離心冷凍干燥機徹底干燥樣品。在濃縮器中加入少量的 NaOH 固體,以去掉多余的溴和甲酸。蒸發干燥約需要 10 min。


    由于許多氨基酸被修飾,推薦用過甲酸氧化的蛋白質用于 S—S/S—H(半胱磺酸)和甲硫氨酸基團(甲硫氨酸砜)的定量分析,而不是序列分析。


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