五、SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳法
SDS
聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白分子量,是根據大多數蛋白都能與陽離子表面活性劑十二烷基硫酸鈉(SDS)按重量比結合成復合物,使蛋白分子所帶的負電荷遠遠超過天然蛋白分子的負電荷，消除了不同蛋白分子的電荷效應,使蛋白分子相對遷移率(R''<[m]>)的大小完全取決于分子量的高低，因此可從已知分子量的標準蛋白的對數和相對遷移率所作的標準曲線中求出供試品的分子量。
1.儀器裝置
除另有規定外，同聚丙烯酰胺凝膠電泳。
2.試劑
(1)丙烯酰胺液溶
稱取丙烯酰胺 22.2g與雙丙烯酰胺0.6g， 溶于100ml水中，貯于褐色瓶中低溫保存。
(2) 凝膠緩沖液
稱取磷酸二氫鈉(NaH2PO4·2H2O)8.82g 、 磷酸氫二 鈉(Na2HPO4 ·12H2O)51.55g與十二烷基硫酸鈉2.0g，加水至1000ml(若有沉淀析出,可加溫至 37℃溶解)。
(3)電泳緩沖液
將凝膠緩沖液稀釋 1倍。
(4)染色液
稱取 25mg考馬斯亮藍R<[250]>,溶于57％乙醇與9.2％醋酸混合液100ml中。
(5)脫色液
取無水乙醇 75ml，加冰醋酸50ml，用水稀釋至1000ml。
3.操作法
除下列規定外，其他均同聚丙烯酰胺凝膠電泳。
(1)制膠
用丙烯酰胺溶液－凝膠緩沖液－水－1.6％過硫酸銨溶液-四甲基乙二胺(需冷卻)(10.1∶15.0∶3.4∶1.5∶0.045) 配制而成。
(2)標準蛋白溶液及供試品溶液的制備
取標準蛋白，加水制成每1ml中含2～5mg的溶液，與水解液(取尿素21.6g和十二烷基硫酸鈉 0.04g，溶于40ml水中)1∶3混合，置冰箱中過夜。供試品照上述方法配制。
(3)電泳 調節電流使每管為 8mA。
4.相對遷移率和分子量計算
將電泳脫色后的區帶用卡尺或用掃描定位法測量染料移動的距離、染色前膠條長度、蛋白移動距離和脫色后的膠條長度。按下式計算相對遷移率： 蛋白移動的距離
染色前的膠條長度 相對遷移率(R''<[m]>)＝───×─── 脫色后的膠條長度 染料移動的前沿距離 以
R''<[m]>為橫坐標,已知分子量標準蛋白的對數為縱坐標,在半對數坐標紙上繪圖,由標準曲線中查出供試品分子量。