核蛋白的提取
①用細胞刮子刮取RAW264.7 細胞與VSMC ，移入2.5mlEP 管中。②將細胞用冰冷PBS 洗兩遍，于4 ℃ , 5000g 離心3min ，沉淀細胞。③加5 倍細胞體積的冰浴緩沖液A 洗細胞一次，于4 ℃ ,5000g 離心3 min 沉淀細胞. ④加3 倍細胞體積的冰浴緩沖液A 懸浮細胞，冰上放置30min 、劇烈振蕩10 次，4 ℃ ,5000g 離心15min ，去上清，沉淀為細胞核。⑤加與細胞等體積的冰浴緩沖液B ，充分混勻，冰上放置30min 后，于40 ℃ ,15 000g 離心15min, 上清為核蛋白。⑥取2μl 核蛋白Bradford 法測定核蛋白濃度，分裝后于-70 ℃ 保存。
2. 探針的標記與純化
A 、探針的標記: 將以下試劑加入冰浴中的0.5m l 的EP 管中，總體積20 時。①未標記的探針:2μl (50ng); ② 10 x 激酶緩沖液:2g 1; ③ [y-32P]ATP: 4μl (40 uCi); ④T4 多聚核甘酸激酶:lμl (10U); ⑤超純水:11μl 。
B. 混勻后37 ℃ 水浴30 分鐘;
C 、加入5μl 1%SDS/100 mM EDTA 短暫渦旋混勻，以終止激酶反應;
3 .探針的純化
①準備MicroSpin' G25 分離柱;②輕輕渦旋分離柱以重懸管內樹脂; ③將蓋子擰松1/4 后去掉管底密封; ④將分離管放入一只1.5mlEP 管中(EP 管作支撐用) ⑤ 735g 離心1分鐘; ⑥加入樣品: ⑦分離管放入一只新的1.5 mlEP 管中，緩慢將樣品加入樹脂床角度平面的中央，735g 離心1 分鐘; ⑧將75μl 超純水加入分離柱，735g 離心1 分鐘; ⑨收集支撐管內純化好的探針，小心丟棄分離管。
4.測定探針的放射活性
取1μl 純化的探針，用閃爍計數器測量其放射活性，放射活性大于1* 10 5 cpm/μl 示標記成功。
5.凝膠遷移阻滯法測定NF-KB
A 、 按下列順序分別將各反應成分加入第一套做好標記的EP 管內: ①結合緩沖液:4μl ②穩定液D:2 μl; ③核提取物:lug; ④去離子水至:16μl.
B 、用移液槍輕輕吸打混勻，40℃下將核提取物預孵育20 分鐘，
C 、在核提取物預孵育期間，按下列順序依次將各成分加入做好標記的第二套EP 管內: ①結合緩沖液:2μl; ②穩定液D:1μl; ③探針:1μl; ④去離子水:4μl 。
D 、將探針棍合物加入預孵育好的核提取物混合物中，用移液器輕輕吸打混勻后，4 ℃ 繼續孵育20 分鐘。
E、EMSA 測定: 預先將5% 非變性丙烯酞胺膠(38:2 ) 和電泳緩沖液(1X TGE) 預冷至4 ℃ , 然后: ①將每反應管內所有反應物加入樣品孔中。同時在一空白孔中加入含溟酚藍的上樣緩沖液，以觀測膠的移動情況。當溟酚藍電泳至玻璃板下1/3 即可停止電泳( 約2 小時) 。②電泳:12.5V/cm(16cm 玻璃板為200V)。
F 、放射自顯影: 電泳完畢后，取出凝膠，用保鮮膜封好; 將凝膠與放入有增感屏的曝光盒中，于-70 ℃ 放射自顯影24 小時。然后將X 光片在顯影液中顯影30sec-1min ，在定影中定影15-30min ，清水沖洗干凈后自然晾干。
G 、圖像分析: 將各測量組的電泳 照片掃描至計算機，然后應用Bandscan 分析軟件對電泳條帶進行灰度測定，并計算平均光密度值(OD) ，以各條帶的OD 值表示相應核轉錄因子的活性。