電荷異構體

　　對于單抗電荷變異體的測定有多種分析方法，20版中國藥典通則3129收錄了單抗電荷變異體測定法-全柱成像毛細管等電聚焦電泳法（icIEF法）外，新版中國藥典將毛細管等電聚焦電泳（cIEF法）也寫入3129通則。

　　離子交換(IEX)色譜和成像毛細管等電聚焦(iCIEF)或（CIEF），傳統上都使用紫外（UV）作為檢測器，無法對分離后的電荷變異體進行更深入的鑒定。為了分析電荷異構體的成因，必須進行準確的定性分析，高分辨率質譜（HRMS）是定性蛋白質分析的有力手段之一。

　　SCX-MA方法

　　賽默飛發表了一種以pH梯度為基礎的SCX-MS方法，用于單抗的電荷異構體分析，僅需要使用低濃度的揮發性緩沖溶液即可實現單抗及其電荷變異體的洗脫，實現了SCX分離與 MS的聯用。此外SCX色譜柱分析100針以上仍然具有較好的重復性和分離度，與在線二維方法相比，該方法更簡單，無需搭建復雜的硬件系統和方法設置即可實現電荷異構體的表征。

阿達木電荷變異體分離圖

阿達木抗體片段分析

阿達木酸堿變異體解析

　　icIEF-Orbitrp方法

　　icIEF-Obritrap HRMS在線聯用分析或可與傳統的LC-MS相結合的離線制備，為在蛋白質治療開發過程中區分和識別電荷異構體體提供了的便捷和可靠的分析策略。

　　1）icIEF質譜在線聯用，直接且快速地識別 PTM，包括可能影響生物治療藥物安全性和有效性的糖基化和電荷變異體。

　　2）高效且簡便得組份分離后與傳統LCMS結合深入表征電荷異構體，以研究您的生物治療藥物的效力、安全性和功效。

　　icIEF-MS在線聯用實例：mAb 1

　　電荷變體分析工作流程

　　使用 ProPac 3R 色譜柱進行蛋白類藥物電荷變體分析

　　Thermo Scientific? ProPac? 3R系列陰離子交換色譜柱和陽離子交換柱，采用了單分散顆粒技術，對于比較難分離的雙特異性抗體、ADC、融合蛋白等樣品，在比較低的流速下比經典的ProPac系列和MAbPac 系列離子交換柱有更好的酸堿峰分離效果。既節約了分析時間，試劑成本，又提高了分離效率。在四元系統上，搭配Thermo Scientific CX-1 pH梯度緩沖液，可以實現快速鹽梯度方法和pH梯度方法開發，可簡化對主要產品和雜質進行高分離度分離的方法優化過程