結果和討論
為確保CyDye標記不對病毒電荷行為產生較大影響，已檢驗過的兩種病毒載體在未標記之前也在瓊脂糖ETC上分離。凝膠被染色[15]，并且在遷移模式上僅觀察到有輕度的改變（數據未列出）。
以Cy?5標記的腺病毒(AV)的瓊脂糖凝膠電泳表明，AV在pH值從5至10的范圍內整體來說表面帶負電荷，而在pH低于5時帶正電荷（圖1）。這與組成腺病毒的六聯體、五聯體和纖維蛋白的等電點相一致[16]。為確定有助于純化的pH范圍，也采用電泳法將未標記的原材料分離出來，并以SYPRO Ruby染色（數據未列出）。
在pH值為8的Q Sepharose XL上能從粗培養液中將病毒分離出來（圖2）。可以使用較低的pH值；然而，結合能力將受影響。
在pH為8時，緩沖液A中能使用達300 mM的NaCl，但是這樣與在緩沖液A中無NaCl時進行的分離相比，柱子的結合能力會降低一半（數據未列出)。
圖1、腺病毒標記的Cy5在2%瓊脂糖
IEF凝膠、pH梯度為3-10中的瓊脂糖
凝膠電泳圖。陰離子和陽離子交換（分
別為AIX、CIX）的等電位點及可能的
pH范圍如圖所示。
層析柱： Q Sepharose XL，置于 XK 16/10 層析柱中
樣本： 重組腺病毒 Ad5 CMV-GFP
樣本體積： 5 ml，置于緩沖液 A 中
緩沖液 A： 50 mM TrisCl (pH 8.0)，5%甘油
緩沖液 B： 緩沖液 A+1M NaCl
梯度： 0-100%緩沖液 B，20CV
流速： 150 cm/h（5ml/min）進樣 30cm/h（1ml/min）
系統： ?KTAexplorer 10
檢測波長： 260 和 280 nm
圖2、采用陰離子交換對細胞裂解產物中的腺病毒進行分離。上樣前采用Benzonase?核酸內切酶處理裂解物。箭頭為腺病毒峰。其純度與采用CsCl離心處理的兩次純化相當。
圖3、紫外線滅活Cy3標記麻疹病毒
在2%瓊脂糖凝膠、pH梯度為3-10
中的分離，pI，pH值和上樣槽如圖
所示。
圖4、采用ETC在pH范圍為3-9的
IEF凝膠中對病毒樣本進行的分析。
凝膠采用SYPRO Ruby染色， 采
用Typhoon掃描儀對電泳帶進行
檢測。