病毒的雞胚培養_絨毛尿囊膜接種

絨毛尿囊膜接種常用于牛痘病毒、天花病毒、單純皰疹病毒的分離，因為這些病毒在絨毛尿囊膜上可形成肉眼可見的斑點狀或痘皰狀病灶。另外，病毒可在絨毛尿囊膜上進行滴定，因為感染性病毒顆粒的數目可以通過產生的斑和痘的數目來計算。該方法還可用于抗病毒血清的滴定試驗，即在有抗體存在的情況下，痘皰形成受到抑制。

雞胚

消毒劑 (2. 5% 碘酒和 75% 酒精）

檢卵燈照明燈卵杯卵盤雞胚開孔器等

1. 接種步驟與方法

(1) 將孵育 10~13 日齡的雞胚放在檢卵燈上，用鉛筆劃出氣室、胎位，并于與胚胎略近氣室端的絨毛尿囊膜發育較好的卵殼上劃一等邊三角形，每邊 10 mm 。

(2) 用碘酒消毒氣室頂端及絨毛尿囊膜記號處，并用開孔器在記號處的卵殼上開一三角形裂痕，不可弄破下面的殼膜，同時在氣室頂端鉆一小孔。

(3) 用小攝子輕輕揭去所開小窗處的卵殼，露出殼下的殼膜，在殼膜上滴一滴生理鹽水，用針尖循卵殼膜纖維方向小心地劃破一隙，但注意切勿傷及緊貼在下面的絨毛尿囊膜。

(4) 用針尖刺破氣室小孔處的殼膜，再用橡皮乳頭緊按氣室小孔向外吸氣，造成負壓，此時鹽水小滴即可自裂隙流至絨毛尿囊膜上，從而使絨毛尿囊膜下陷而形成人工氣室。

(5) 用注射器通過卵殼的窗口滴 0. 05~0. 1 ml 病毒液于絨毛尿囊膜上，然后將雞胚輕輕地旋轉使接種物擴散到人工氣室之下的整個絨毛膜尿囊膜上。

(6) 在卵殼的窗口周圍涂上半凝固的石蠟，作成堤狀，立即用消毒膠布封口。也可用揭下的卵殼封口，即將卵殼蓋上，接縫處涂以石蠟，但石蠟不能過熱，以免流人卵內。將雞胚始終保持人工氣室在上方的位置， 33~35℃繼續培養 48~72 h 。

2. 解剖與收獲

(1) 用 2. 5% 的碘酒和 75% 的酒精分別消毒人工氣室上的卵殼，去除窗孔上的膠布。

(2) 將滅菌剪子插入窗內，沿人工氣室的界限剪去卵殼及殼膜，露出絨毛尿囊膜，再用滅菌眼科攝子將膜正中夾起，用剪刀沿人工氣室邊緣將膜剪下，放人加有滅菌生理鹽水的培養皿內，觀察病灶形狀或用于傳代，或用 50%甘油保存。同時作無菌培養。