4）去垢劑
去垢劑(表面活性劑)是一類即具有親水基又具有疏水基的物質，一般具有乳化、分散、和增溶作用，可分陰離子、陽離子和中性去垢劑等多種類型，中性去垢劑在蛋白提取鐘應用的較多。
A．中性去垢劑
又稱非離子表面活性劑，對蛋白質的變性作用影響較少，宜于蛋白質或酶提取之用。一般市售中性去垢劑有聚乙二醇類，如PEG200；多元醇類表面活性劑，如山梨醇、司盤類和吐溫類；聚氧乙烯脂肪醇醚，如芐澤類、平平加類；聚氧乙烯烷基苯酚醚，如Igepal
CO、乳化劑OP、Triton、Pluronic(用作消泡劑、潤濕劑、增溶劑)、泡敵。中性去垢劑作用后可通過Sephadex
LH-50柱除去；也可直接上DEAE-Sephadex柱層析分離目的蛋白，不必先除去去垢劑。
B．陰離子去垢劑 常見的有十二烷基硫酸鈉和十二烷基璜酸鈉。前者可促進核蛋白的溶解，將核酸釋放出來，并對核酸酶有一定抑制作用，常用于核酸的提取。
C．陽離子去垢劑 如潔爾滅、新潔爾滅、CTAB、CPC、ZEPH、克菌定、消毒凈（TMPB）、杜滅芬等，消毒滅菌類居多。
D．天然表面活性劑 又稱為生物表面活性劑，包括種類較為廣泛，如各種樹膠（阿拉伯膠、杏膠、桃膠、果膠）、明膠、皂甙、卵磷脂、豆磷脂、瓊脂、海藻酸鈉、酪蛋白、膽甾醇、膽酸類、多糖類（如環糊精）等。
E．兩性表面活性劑 在堿性水溶液中呈陰離子表面活性劑的性質，起泡性好，去污力也強；在酸性溶液中則呈現陽離子表面活性劑特征，其殺菌性很強。
5)變性劑
蛋白質變性劑的作用是破壞蛋白質的次級鍵，如氫鍵、鹽鍵和疏水力，引起天然構象的解體；它們并不破壞共價鍵，如肽鍵和二硫鍵，故不涉及一級結構的改變。變性劑有溶解型和沉淀型兩類，SDS、尿素和胍鹽是有效的溶解型變性劑，而三氯乙酸、甲醇、和氯仿/異戊醇是有效的沉淀變性劑。一般而言，變性劑應用時常大大過量，破壞氫鍵的變性劑用量至少兩倍于氨基酸的克分子數，如1克蛋白質可可結合1.4g。SDS溶于水可達25%，對溫度敏感，W/V貯存液最為方便。需要注意的是SDS的鉀鹽是不溶性的，所以SDS溶液中要避免混入鉀鹽。尿素極易溶于水，可達10mol/L,在8mol/L以上要注意溫度以防止沉淀。尿素在水中緩慢分解形成氨及高度活性的氰酸離子，故要防止高溫。三氯乙酸與過氯酸（TCA，PCA）都是極好的沉淀劑，能沉淀蛋白質和核酸，前者應用更為廣泛。
第二節 提取方法
一．固液萃取
在固液萃取中，提取物是由固相轉為液相，或由細胞內轉為細胞外，其提取效率與物質的擴散作用有關。
為了增加擴散物質的量，也就是提高提取速度，常采用如下措施：
1）提高材料的破碎程度，以增加擴散面積，減少擴散距離；
2）進行攪拌，使已擴散的溶質迅速與溶劑混勻，以保持兩項界面最大濃度差，或分多次提取，不斷更換新鮮溶劑，以提高擴散速率；
3）延長提取時間，提高提取溫度，以及減少溶液粘度（如屬大分子核酸干擾，加入少量魚精蛋白或硫酸鏈霉素沉淀除去）等。
實際上從破碎后的固體細胞提取所需組分，當細胞破碎程度及提取溫度受到限制時，采用少量多次提取方法較為有利。
二．液液萃取
液液萃取選用的溶劑必須與被抽提的溶液互不混合、且對被抽提的溶質有選擇性的溶解能力。最常用的液液萃取溶劑為二相溶劑，水或水-醇為一相，與水互不相溶的各種碳氫化合物，如低級醚、酯、苯酚等，為另外一相。
第三節 蛋白質和酶的提取分離
一．蛋白質及其溶解性質
蛋白質有多種分類方法：
1）按其功能 活性蛋白和非活性蛋白
2）按其結構 簡單蛋白和結合蛋白
3）按其溶解度 水溶性蛋白、醇溶蛋白、硬蛋白（不溶于水、稀酸、稀堿和有機溶劑，遇強酸或強堿溶解）。一般來說，大部分蛋白可溶于水、稀酸、稀堿或稀鹽溶液，少數與脂類結合的蛋白質則溶于乙醇、丙酮、丁醇等有機溶劑。
二．蛋白質的一般提取方法
1． 水溶液提取
凡能溶于水、稀鹽、稀酸或稀堿的蛋白質，一般可用稀鹽或緩沖溶液進行提取，稀鹽溶液和緩沖溶液，有利于穩定蛋白結構和增加蛋白質溶解度。
此時應考慮以下因素：
1）提取液體積 加入量太少則提取不完全，加的過多則不利于濃縮，一般為原材料的3-6倍的體積，可一次或分次提取。
2）鹽濃度
一般在0.02-0.2M的范圍內，常用的稀鹽和緩沖液有0.02-0.05M磷酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液、0.09-0.15M的氯化鈉等。在某些情況下，也用到較高的鹽濃度，如提取脫氧核糖蛋白及膜蛋白。有時為了螯合某些金屬離子和解離酶分子與其它分子的靜電結合，選用檸檬酸緩沖系統和焦磷酸緩沖液可獲得較好效果。