1． 滅菌物品：
（1） 大濾紙:
（2） 滅菌針筒（含脫脂棉和玻璃釬維）
（3） 脫脂棉
（4） 離心管
（5） 無菌ddH2O
（6） 0.6M MgSO4
（7） 培養基：
A. 等滲培養基（RCM）：麥芽汁 1%，酵母膏 1%，蛋白胨 0.4%，葡萄糖 0.4%，pH自然，用0.6M蔗糖配制。
B. 破膜培養基：麥芽汁 1%，酵母膏 1%，蛋白胨 0.4%，葡萄糖 0.4%，pH自然，用水配制。也可以采用含有0.6M蔗糖的PDA作為等滲培養基，破膜培養基不加0.6M蔗糖即可。
（8） 溶壁酶酶液：1.5%，用0.6MMgSO4配制，過濾除菌；
（9） 培養皿：根據樣品個數
2． 制備方法：
（1） 稱取離心管重量并記錄；
（2） 用接種針挑出菌絲，并用滅菌雙蒸水沖洗一次，然后用無菌的0.6M MgSO4沖洗兩次，用滅菌的濾紙吸干，放入已知重量的離心管，稱重并記錄；
（3） 計算得到菌絲重量，按0.2（g）：1(mL)加入滅菌酶液，震蕩均勻；
（4） 28℃，3~4小時，搖床震蕩（輕微），酶解，同時每30min鏡檢觀察原生質體數量；
（5） 滅菌注射器（含脫脂棉和玻璃釬維）過濾；
（6） 離心：2500rpm,2min
（7） 用0.6M MgSO4洗滌沉淀3次；
（8） 用用0.6M MgSO4定容至最初的加酶量；
（9） 鏡檢計數；記錄；
（10） 涂板后再生培養，第7天后每隔1天計數一次。