正磷酸單酯磷酸水解酶（最適堿度）。
正磷酸單酯＋H2O → 醇＋Pi
這個酶可以從各種渠道得來，如細菌和哺乳動物腸黏膜。每個酶分子有兩個 Zn2＋離子鍵。堿性的磷酸酶頻繁地與抗體配位，例如在 Westernblots 中及酶聯免疫鑒定（ELISA）中。細菌酶的最適 pH 是 8.0，哺乳動物的要較高一點（9～10）。依照反應方案，以下的實驗步驟用到了增加黃色的著色強度。
對磷酸硝基苯＋H2O →對硝基酚＋Pi
另外，鄰羧苯磷酸在堿性介質中可以用作酸性磷酸酶。
| 實驗材料 | 酶樣品 |
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| 試劑、試劑盒 | 甘氨酸-KOH對磷酸硝基苯 |
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| 儀器、耗材 | 分光光度計 |
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| 實驗步驟 | 實驗所需「試劑」具體見「其他」 
0.02 ml 酶樣品
25 ℃ 時于 405 nm 處吸收值降低，ε405＝18.5×103 l/（mol·cm）。 |
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| 注意事項 |
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| 其他 | 試劑：
0.1 mol/L 甘氨酸-KOH，pH 10.5，1 mmol/L Mg2＋，0.1 mmol/L Zn2＋（溶解 7.5 g 甘氨酸、203 mg MgCl2·6H2O 和 14 mg ZnCl2于 750 ml H2O 中，用 1 mol/L KOH 調節至 pH 10.5 并且用 H2O 補充至 1 L）
0.5 mol/L 對磷酸硝基苯（二鈉鹽，六水化合物，Mr＝371.1，1.86 g 溶于 10 ml 水中）
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