基本方案
| 實驗方法原理 | |
|---|---|
| 實驗材料 | 酶溶液 |
| 試劑、試劑盒 | 磷酸鉀 NaCl NaOH 二氧雜環乙烷 羰基二咪唑 |
| 儀器、耗材 | 吸濾器 聚酯小片 |
| 實驗步驟 |
實驗所需「試劑」具體見「其他」 1. 堿解和活化 聚酯小片（每片 2 cm2，10 片）在 10 ml 10％（質量濃度）NaOH 中室溫孵育 10 min。用水沖洗五次，每次 10 ml，之后浸沒在二氧雜環乙烷中 30 min，然后用二氧雜環乙烷沖洗五次以去除殘留的水。其后，聚酯小片在溶有 35 g/l 羰基二咪唑的二氧雜環乙烷中孵育 30 min。最終用二氧雜環乙烷沖洗五次、用 0.1 mol/L pH 7.5 的磷酸鉀沖洗三次。 2. 酶的偶聯 聚酯小片浸沒在 10 ml 的酶溶液中，在室溫過夜孵育，對于敏感的酶在 4℃ 孵育。在吸濾器上先用溶有 0.5 mol/L NaCl 的 0.1 mol/L pH 7.5 磷酸鉀沖洗，再用 0.1 mol/L pH 7.5 磷酸鉀沖洗，以去除未結合的酶。聚酯小片能在緩沖液中 4℃下儲存一周。為了儲存更長時間，必須用水短暫沖洗這些聚酯小片后在空氣中干燥（不推薦在敏感的酶中使用）。
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| 注意事項 | |
| 其他 |
試劑： 0.1 mol/L pH 7.5 的磷酸鉀 溶有 0.5 mol/L NaCl 的 0.1 mol/L 磷酸鉀，pH7.5 100 g/l NaOH 二氧雜環乙烷 溶有 35 g/l 羰基二咪唑（CDI，Mr＝162.2）的二氧雜環乙烷
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