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  • DNA甲基化是基因組DNA的一種主要表觀遺傳修飾形式。近年來,大量研究表明DNA甲基化修飾對于維持正常細胞功能、傳遞基因組遺傳印記、胚胎發育以及人類腫瘤發生,起著至關重要的作用,由此甲基化研究成為表觀遺傳學,乃至生命科學研究的熱點領域。

    那么如何檢測單個基因或者全基因組的甲基化水平或者甲基化位點呢?

    當前科研領域最常用的檢測方案是使用亞硫酸鹽將DNA中未甲基化的胞嘧啶(C)轉化為尿嘧啶(U),而甲基化的胞嘧啶則保持不變,通過設計特異性的甲基化引物,進行甲基化特異性-PCR或者亞硫酸鹽測序法,從而達到實驗目的。那么如何確保DNA中未甲基化的胞嘧啶100%完成了轉化,轉化過程中防止DNA降解,以及轉化后DNA的有效回收成了其中關鍵!

    許多研究人員都會在亞硫酸氫鹽轉化之前富集甲基化的DNA。一來可降低背景,二來也可節約成本。目前有兩種基本方法,一個是利用5’-甲基胞嘧啶的抗體來捕獲甲基化DNA,即甲基-DNA免疫沉淀(MeDIP);另一個是利用包含了甲基-CpG結合結構域(MBD)的蛋白來得到同樣的結果。

    目前市場上的大部分產品都是利用后一種方法。這兩種方法的差別在于MeDIP是在單鏈DNA的背景下特異識別5’-甲基胞嘧啶,而后者更偏愛雙鏈DNA。MBD的另外一個優勢是:在利用蛋白酶K將免疫沉淀后的DNA洗脫下來時,MBD2中的甲基化DNA可根據鹽梯度而逐步釋放。這樣,你就能區分不同程度的甲基化DNA。

     磁珠法DNA甲基化方案—高效特異的DNA亞硫酸鹽轉化與純化

    作為表觀遺傳學的專業解決方案供應商,艾美捷隆重向您推薦Epigentek的BisulFlash DNA Bisulfite Conversion Mag-96 Kit修飾試劑盒。作為最新研發的磁珠法-DNA亞硫酸鹽轉化試劑盒,此試劑盒提供了最優化的緩沖液配方和試劑,能對DNA樣品進行超快速的亞硫酸氫鹽轉換處理。轉化后的DNA經過磁珠結合,洗滌,洗脫,相對于柱純化和瓊脂糖珠beads純化,有效地降低了非特異性吸附帶來的干擾!

    本試劑盒作為一款基于96孔板的,適用于高通量研究的DNA亞硫酸鹽轉化試劑盒,還具有以下優點:

    •  快速:96個樣品同時操作,僅需1h20min,平均下來每個樣品只需50s。

    •  便捷:提供液體形式可直接使用的轉化液混合物,無需復雜配置。

    •  高效:在DNA變性的同時,完成C-T的轉化。

    •  效率:轉化效率達到了目前市場上其它同類試劑盒無法達到的99.99%以上,同時錯誤轉化率也低至0.1%,實驗結果更可靠。

    •  靈活:可設計單次實驗,亦可選擇高通量研究。

    *本試劑盒需配套96孔磁力架使用

    EpiMag HT (96-Well) Magnetic SeparatorCat#Q10002-1

     磁珠法DNA甲基化方案—高效特異的DNA亞硫酸鹽轉化與純化                      磁珠法DNA甲基化方案—高效特異的DNA亞硫酸鹽轉化與純化

    Figure.2 試劑盒操作流程示意圖               Figure.3 轉化后DNA,qPCR驗證的效果圖


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