磷酸酶a的測定實驗

酶斷裂多糖的α-1，4-糖苷鍵：

（葡萄糖）n＋P_i →（葡萄糖）n-1＋葡萄糖-1-P

實驗中反應與葡萄糖磷酸變位酶偶聯：

葡萄糖-1-P → 葡萄糖-6-P

并且 6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化：

葡萄糖-6-P＋NADP^＋ → 葡萄糖酸-6-P＋NADPH＋H^＋

磷酸酶 a

磷酸鉀 EDTA 糖原 葡萄糖磷酸變位酶 6-磷酸葡萄糖脫氫酶

分光光度計

實驗所需「試劑」具體見「其他」

0.98 ml 實驗混合物

0.02 ml 酶樣品

25 ℃ 時，于 340 nm 處吸收值降低，ε₃₄₀＝6.3×10³ l/（mol·cm）。

試劑：

0.05 mol/L 磷酸鉀，pH 6.8

0.01 mol/L EDTA（Mr＝292.3，29.2 mg 溶于 10 ml 水中）

糖原（60 mg 溶于 10 ml 水中）

1 mmol/L 1，6-二磷酸葡萄糖（脂鯉環己基銨鹽，Mr＝736.8；7.4 mg 溶于 10 ml 水中）

0.01 mol/L NADP（Mr＝787.4；79 mg 溶于 10 ml 水中）

1 mol/L MgCl₂（Mr＝203.3，六水合物，2 g 溶于 10 ml 水中）

葡萄糖磷酸變位酶 100 U/mg（100 U/ml 溶液）

6-磷酸葡萄糖脫氫酶，200～400 U/mg（300 U/ml 溶液）。兩種酶在使用之前，都要用游離的銨鹽制備。如果外加了硫酸銨懸浮液，在用前必須用 0.05 mol/L 磷酸鉀 pH 6.8 透析。