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  • 發布時間:2019-03-28 20:09 原文鏈接: 離子交換層析實驗離子交換層析介質和層析柱的選擇

    實驗步驟

    1.  離子交換凝膠的選擇依據:


    (1)根據蛋白質的pH只穩定范圍。蛋白質在等電點pI以上pH穩定時選擇陰離子交換凝膠介質,在pI以下pH的穩定時,則選用陽離子交換凝膠介質。

    (2)根據特分離蛋白質的分子大小。分子量在10 000~100 000 0 Da 的蛋白,選用如DEAE-Sephacel和DEAE-Sepharose樣凝膠;更大的分子,用Sephadex A-25或C-25。


    2.  柱子大小取決于聽用凝膠的結合容量,使用最頻繁的是1 cm、2 cm、2.5 cm 直徑,柱長通常少于之20 cm 對成分復雜的樣品,用更大的柱子,

    3.  有商品供應的預裝的FPLC離子交換柱可用。它們是Pharmacia的mono-Q(陰離子)和Mono-Q(陽離子)柱,有三種大小尺寸:0.5 mmx5 cm(25 m樣品)、1 cmx10 cm(200 mg 樣品)和 1.6 cmx10 cm(500 mg 樣品)。

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