1. 選擇一根適合的色譜柱,常為C18柱;
2.準備流動相時僅使用HPLC級別的水和色譜級試劑;
3.選擇能給出最佳分離度的流動相成分和濃度;
4.如果樣品中有非離子化物質,在嘗試離子化分離之前首先優化分離情況;
5.選擇合適的離子對系列試劑以提供相應的離子配對:對于酸性分析物使用酸性離子對試劑;對于堿性分析物使用堿性離子對試劑;
6.通過比較選擇所得分離度最好的離子對試劑;
7.一旦離子對試劑已經確定,調節流動相的pH值將分離度最大化;因為微小的pH值改變對保留性質和選擇性都有較大的影響,所以仔細小心的小幅度調節pH值;
8.理想狀況下,流動相中的離子對試劑濃度應為0.005M,但是稍微增加離子對試劑可能會稍微增加保留性質并因此優化分離情況。