實驗方法原理
實驗材料 組織
試劑、試劑盒 磷酸鉀戊二醛蔗糖焦銻酸鉀鋨酸
實驗步驟
1. 組織切成約 1 mm3 的小塊，用 0.09 mol/L 磷酸鉀（或草酸鉀）-3％ 戊二醛（pH 7.3，用 0.1％～1％ KOH 調 pH）固定 4 h 以上，4℃。也有人推薦固定早期用微波照射，以加速固定液滲入細胞內部（關于微波照射使用情況參見有關章節）。
2. 固定后用 0.09 mol/L磷酸鉀（或草酸鉀）-4％ 蔗糖（pH 7.3）漂洗2～4 h，換液3 次。
3. 1.5％～2％ 焦銻酸鉀-1％ 鋨酸4℃ 固定 2 h。
4. pH 10 的蒸餾水漂洗 3 次×10 min，以洗盡殘留的焦銻酸鹽。
5. 脫水、包埋同常規，切片，染色或不染色。
6. 電鏡觀察。
注意事項
1. 焦銻酸鉀常溫溶解很慢，加熱至 90～100℃ 則可很快溶解。
2. 應用磷酸鉀或草酸鉀結果并不完全相同。一般心、肝、腎、腦等組織、血細胞及培養細胞都可以用。
3. 焦銻酸鹽還能與鈉、鎂等離子反應，形成沉淀，因此需控制實驗條件，使焦銻酸鹽主要與鈣反應，少或不與鈉、鎂反應，用 1.5％～2％ 焦銻酸鉀 4℃ 反應較為合適（在此反應條件下的實驗進行 EDX 能譜分析，結果表明沉淀中不含或極少含鈉、鎂）。
4. 焦銻酸鉀滲透到細胞內速度很慢，如果組織用灌注固定，再用振蕩切片機切成薄片，效果較好。
5. 細胞內有離子鈣及結合鈣，并且二者可以相互轉換。從理論上講，與磷酸鹽（草酸鹽）-焦銻酸鹽反應的應為離子鈣，但實際情況可能并非完全如此，部分結合得不是很牢固的結合鈣也可能與磷酸鹽（草酸鹽）-焦銻酸鹽反應形成沉淀。
6. 切片后染色，常規觀察，可同一般染色。如果要做能譜分析，則不染色，必要時可在鋨酸固定后再用 1％ 鋨酸 2％ 亞鐵氟化鉀固定，以提高反差。