梅毒血清補體結合試驗分兩個階段進行，先使試驗系統中被檢血清、已知抗體和定量補體作用一段時間，再加入指示系統（綿羊紅細胞與溶血素）若被檢血清中無已知抗原相對應的抗體，就不形成抗原抗體復合物，補體仍全部游離，則被指示系統的抗原－抗體復合物固定，使紅細胞發生完全溶血，試驗結果為陰性。反之，若被檢血清中有已知抗原相對應的抗體，形成大量抗原抗體復合物，當補體全部被固定時，無游離補體存在，則紅細胞完全不溶，試驗結果為陽性。
