照高效液相色譜法（2010年版藥典二部附錄ⅤD）測定。
1、色譜條件與系統適用性試驗
用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.067mol/L磷酸二氫銨溶液（用三乙胺調節pH值至6.5）－乙腈（65：35）為流動相：檢測波長為210nm。取羅紅霉素對照品和紅霉素標準品適量，加流動相溶解并稀釋制成每1mL中各約含1mg的混合溶液，取20μL注入液相色譜儀，羅紅霉素峰的保留時間約為14分鐘，其與紅霉素峰的分離度應不小于15.0，羅紅霉素峰與相對保留時間約為0.95處雜質峰的分離度應不小于1.0，與相對保留時間約為1.2處雜質峰的分離度應不小于2.0。
2、測定法
取本品適量，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋制成每1mL中約含1.0mg的溶液，精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取羅紅霉素對照品，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。