實驗方法
隱血試驗（occult blood test,OBT）目前主要采用化學法。如鄰聯甲苯胺法、還原酚酞法、聯苯胺法、匹拉米洞法,無色孔雀綠法、愈創木酯法等。其實驗設計原理基本于血紅蛋白中的含鐵血紅素部分有催化過氧化物分解的作用，能催化試劑中的過氧化氫，分解釋放新生態氧，氧化上述色原物質而呈色。呈色的深淺反映了血紅蛋白多少，亦即出血量的大小。經上試驗方法雖然原理相同，但在實際應用中卻由于糞便的成分判別很大，各實驗室具體操作細節如糞便取材多少，試劑配方、觀察時間等不同，而使結果存在較在差異。多數方獻應用稀釋度的血紅蛋白液對這些方法靈敏度的研究表明，鄰苯甲苯胺法、鄰甲苯胺法、還原酚酞法最靈敏，可檢測出0.2-1mg/L的血紅蛋白，只要消化道有1-5ml的出血就可檢出。還原酚酞法由于試劑極不穩定，放置可自發氧化變紅而被摒棄。高度靈敏的鄰聯甲苯胺法常容易出現假陽性結果，中度靈敏的試驗包括聯苯胺法、無色孔雀綠法，可檢出1-5mg/L的血紅蛋白，消化道有5-10ml出血即為陽性。聯苯胺法由于有致癌作用而無色孔雀綠法在未加入異喹啉時靈敏度差，需（20mg/L血紅蛋白，）試劑配制和來源均不如拉米洞方法方便。愈創木酯法靈敏度關，需6-10ml/L血紅蛋白才能檢出，此時消化道出血可達20ml但假陽性很少，如此法為陽性，基本可確診消化道出血。目前國內外生產應用四甲基礎聯苯胺和愈創木酯為顯色基質的隱血試帶，使隱血試驗更為方便，但未要么本解決隱血試驗方法的學中的問題。
以上各種隱血試驗化學法雖簡單易行，但均基于血紅蛋白中的血紅素可促使又氧水分解釋放新生態氧，使色原物質氧化這一原理，方法上缺乏特異準確性。此外化學試劑不穩定，久置后可使反應減弱。外源性動物儀器如含有血紅蛋白，肌紅蛋白、其血紅素的作用均可使試驗呈陽性，大量生食蔬菜中含有活性的植物過氧化物酶也可催化雙氧水分解，出現假陽性反應，所以除愈創木酯法外均要求素食3天，為此有人提出將糞便用水作1：3稀釋加熱煮沸再加冰乙酸和乙醚提取血紅蛋白測定可排除干擾。此法雖然可靠，但不適用于常規工作。加外血液如在腸道停留過久，血紅蛋白被細菌降解，血紅素不復存在，則會出現與病情不符的陰性結果，病人服用大量維生素C劃其它具有還原作用的藥物，以實驗中可使過氧化物還原，不能再氧化色原物質，亦可使隱血試驗呈假陰性。除上樁干擾隱血試驗亦可由于檢驗人員取材部位不同，標本反應時間不同，檢驗員對顯色判斷不同，故在不同一方法的試驗中，還可產生誤差等，致使目前國內外尚無統一公認的推薦的方法，更談不到實驗的標準化。
為解決隱血試驗的特異性問題及鑒別消化道出血部位，當前發展的最快的是免疫學方法，如免疫單擴法、對泫免疫電泳、酶聯免疫吸附試驗、免疫斑點法、膠乳免疫化學凝聚淪，放射免疫擴散法、反向間接血凝法、膠體金標記夾心免疫檢驗法等，此類試驗所用抗體分為兩大類，一種為抗人血紅蛋白抗體，加一種抗人紅細胞基質抗體。免疫學方法具有很好的靈敏度，一般血紅蛋白為0.2mg/L,0.03mg/g糞便就可得到陽性結果，且有很高的特異性，各種動物血血紅蛋白在500mg/L辣根過氧化物酶在2000mg/L時不會出現干擾，因而不需控制飲食，據Herzog和Cameron等研究，正常人24小時胃腸道生理性失血量為0.6ml，若每日在于2ml，則屬于病理性出血。由于免疫學方法的高度敏感性，又由于有正常的生理性失血，如此高的靈敏度，要在某些正常人特別是服用刺激備用腸道藥物后可造成假陽性。但免疫學支隱血試驗主要檢測下消化道的優點，目前被認為是對大腸癌普查最適用的試驗，免疫學法隱血試驗主要檢測下消化道出血，約有40-50%的上消化道出血不能檢出。原因是：①血紅蛋白或紅細胞經過消化酶降解就業性或消化殆盡已不具有原來免疫原性；②過量大出血而致反應體系中抗原過剩出現前帶現象；③病人血紅蛋白的抗原與單克隆抗體不配，因此有時外觀為柏油樣便而免疫法檢查卻呈陰性或弱陽性，此進需將原已稀釋的糞便再稀釋50-100倍重做或用化學法復，檢。近年來某些實驗室還采用卟啉熒光法血紅蛋白定量試驗，用縶草酸試劑使血紅素變為卟啉進行熒光檢測，這樣除可測糞澡未降解的血紅蛋白外，還可測血紅素衍化物卟啉，從而克服了化學法和免疫法受血紅蛋白降解影響缺點，可對上、下消化道出血同樣敏感，但外源性血紅素、卟啉類物質具有干擾性，且方法較復雜，故不易推廣使用。此外免疫學的方法也從檢測血紅蛋白與人紅細胞基質擴展到測定糞便中其它隨出血而出現的帶有良好的抗原性而又不易迅速降的蛋白質、如白蛋白、轉鐵蛋白等，靈敏度達2mg/L。
臨床意義
糞便隱血試驗對消化道出血的診斷有重要價值，現常作為消化道惡性腫瘤早期診斷的一個篩選指標。正常人24h的胃腸道生理性失血量約0.6ml，用高靈敏度的化學法隱血試驗（可檢出消化道出血1ml以上）一般也難以檢出；用靈敏度更高、特異性強的免疫學方法有時可出現假陽性，故值得注意。陽性：在消化道潰瘍性出血時呈間斷性陽性；而消化道癌癥時呈持續性陽性，因此可作為良、惡性出血的一種鑒別。陽性還見于腸結核、潰瘍性結腸炎、結腸息肉、鉤蟲病、腎出血綜合征等。