1. 實驗原理
過碘酸是氧化劑,使含有乙二醇基(-CHOH—CHOH)的多糖類物質(糖原粘多糖、粘蛋白、糖蛋白及糖脂等)氧化,形成雙醛基(—CHO—CHO)。醛基與雪夫試劑中的無色品紅結合,使無色的品紅變成紫紅色化合物,定位于含有多糖類的細胞內。
2. 標本采集
2.1 病人準備:了解病人是否對局麻藥有過敏史。凝血因子嚴重缺陷引起的出血性疾病,穿刺部位有炎癥或有畸形,晚期妊娠婦女作骨髓穿刺時要慎重。
2.2 標本種類:新鮮抽取的骨髓穿刺液
2.3 標本采集要求
2.3.1 高壓消毒的穿刺針,一次性無菌手套和抽取骨髓液的無菌注射器。
2.3.2 臨床上首選穿刺部位為髂后上棘;翻身困難,需多部位穿刺患者可選擇髂前上棘為穿刺部位。小于3歲的小兒還可選擇脛骨頭內側為穿刺部位。
3. 標本儲存:滴加固定液蓋滿血膜5分鐘,水洗待干室溫避光保存。
4. 標本運輸:室溫運輸
5. 標本拒收的標準:溶血、稀釋標本不能作測定
6. 試劑
6.1 試劑名稱:血細胞PAS染色測定
6.2 試劑生產廠家:上海太陽生物技術公司
6.3 試劑組成
試劑1:PAS固定液,10%甲醛甲醇溶液。2℃-8℃避光保存,有效期六個月。
試劑2:PASⅠ液,10g/L(1%)過碘酸溶液。2℃-8℃避光保存,有效期六個月。
3:PASⅡ液,又稱Schiff氏液。2℃-8℃避光保存,有效期六個月。
試劑4:蘇木素復染液。2℃-8℃避光保存,有效期六個月。
7. 操作步驟
7.1 涂片滴加固定液5-8滴,蓋滿血膜即可,5分鐘,水洗待干。
7.2 滴加Ⅰ液10分鐘,水洗待干。
7.3 置入Ⅱ液內室溫(20~25℃左右為宜)暗處放置30分鐘,然后流水沖洗數分鐘。
7.4 蘇木素復染1~2分鐘,水洗待干,鏡檢。
8. 結果判斷
8.1 陽性結果—細胞內出現紅色沉淀物,定位于胞質。
8.2 陰性結果—細胞內無紅色沉淀物。
9. 臨床意義
.1 粒細胞系統自早幼粒階段以下均可呈陽性,且隨細胞分化而加強。
9.2 單核細胞系統可呈彌散狀弱陽性伴細顆粒狀。
9.3 淋巴系統可呈快狀或粗顆粒狀陽性。
9.4 巨核細胞系統(血小板)可呈粗塊狀或團塊狀陽性。
9.5 紅細胞系統正常情況下呈陰性,當某些疾病時可呈陽性,如MDS,AML-M6時。
10. 操作性能:快速簡便,特異性強,靈敏度高。
11. 方法局限性
11.1 標本應新鮮,且未受其他化學物品污染。
11.2 滴加Ⅰ液后水洗應充分,然后待涂片完全干燥后才能置入Ⅱ液內。
11.3 PASⅡ液保存不當或時間過久將會變紅,并使陽性強度降低,且不能反復使用。