一、紙層析分離中的顯色:
1、顯色劑顯示:被分離物質與顯色劑生成有顏色的化合物,顯示斑點位置。常用噴霧法 、浸漬法和涂刷法。
2、紫外光顯示:有些物質受紫外光照射會發出熒光,可在紫外光照射下觀察到被分離物質的斑點。
3、熒光薄層檢測:如果樣品斑點在紫外光照射下不顯熒光,可在吸附劑中加入熒光物質或在制備好的薄層上噴霧熒光物質,制成熒光薄層,這樣在紫外光照射下薄層顯示熒光,而樣品斑點不顯熒光。
二、紙層析分離結果分析:
紙層析分離結果分析包括定性分析和定量分析,常與離心機分離技術結合使用。
1、定性分析:
層析后的斑點顯示出來后,計算出各斑點的遷移率,即可以對物質進行定性分析。
2、定量分析:
(1)剪洗比色法:
將斑點剪下,用適當的溶劑洗脫后,通過分光光度計進行比色定量。
(2)直接比色法:
用特制的分光光度計直接測量濾紙上斑點顏色的濃度,畫出曲線,由曲線所包含的面積可求出待測物的含量。
(3)面積測量法:
實驗證明,圓形或橢圓形斑點的面積與物質含量的對數成正比,所以可用測量斑點面積的方法求得物質的含量。