組織固定固定液的選擇

影響標本固定的因素很多，如組織與固定液的比例、固定時間、固定溫度等；除此之外，固定液本身也很重要，若所選固定液不當，細胞內蛋白質、脂類、核 酸等成 分將會有不同程度地損失。固定劑最好隨配隨用，并注意其濃度和酸堿度。因此根據實際工作的目的，選用合適的固定液非常重要。下面是一些常用固定液的配制方 法及適用范圍。

1．單純固定液

(1)4％中性甲醛固定液：最常用的固定液，能滿足常規HE及免疫組化、PCR等工作。一般無特殊要求的病理標本均適用。尤其值得注意的是，中性甲 醛是以 pH 7．2～7．4的磷酸緩沖液為溶劑配制的，其固定效果及對組織抗原性的保存均優于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后應密封并保存在陰涼處，保存時間不 超過一個月。
甲醛(40%) 100 ml
無水磷酸氫二鈉 6.5 g
磷酸二氫鈉 4.0g
蒸餾水 900 ml

(2)乙醇固定液：使用時以80％～95％的濃度為宜，具有硬化、固定、脫水等作用，對組織滲透力較弱，因此很少單獨使用，但其保存組織中的核酸強于中性甲醛，故常用于有核酸操作的實驗或檢查，如果用于證明尿酸結晶和保存糖原，可用100%乙醇固定組織。

(3)4％的多聚甲醛：主要用于培養細胞的固定。

2．混合固定液

(1)乙醇一甲醛(乙醇－福爾馬林，AF)固定液：適用于皮下組織中肥大細胞的固定。該固定液有固定兼脫水作用，固定后的標本可直接入95％乙醇脫水。

甲醛(40％) 100 ml

95％乙醇 900 ml

(2)B5(醋酸鈉一升汞一甲醛)固定液：多用于固定淋巴組織。染色前應進行脫汞沉淀處理。
無水醋酸鈉 1.25 g
升汞 6.0 g
蒸餾水 90 ml
使用前加入甲醛 10 ml

(3)Bouin固定液：特別適用于睪丸活檢組織的固定。Bouin液對組織固定較均勻，收縮很少，不會使組織變硬變脆。需現配現用。
飽和苦味酸水溶液(約1.22%) 75 ml
甲醛 25 ml
冰醋酸 5 ml

(4)Carnoy固定液：穿透能力強，可很好的固定細胞質和細胞核，特別適合于固定外膜致密的組織，亦適用于糖原及尼氏小體的固定。
無水乙醇 60 ml
氯仿 30 ml
冰醋酸 10 ml

(5)Zenker固定液：經此液固定的標本，細胞核和細胞質染色頗為清晰，但成本較昂貴且需特殊處理汞。該固定液要避免接觸陽光，以免引起化學變化而失效。
升汞 5.0 g
重鉻酸鉀 2.5 g
硫酸鈉 1.0g
蒸餾水(加至) 100 ml