一、固定的目的和意義
活體組織一旦停止血液循環和物質代謝就會因物質代謝障礙產生一系列的生物化學和組織化學改變，并導致形態學上可見的細胞器變化和細胞組織的形態改變直至腐
敗自溶。固定的目的就是要通過使用化學和物理的方法，盡可能地保存組織細胞離體時具有的生理和病理形態結構及生物化學和免疫化學成分。
良好的固定是制作優秀病理切片的基礎，也是特殊染色、組織化學、免疫組織化學和組織原位分子雜交等技術方法賴以成功的基礎。
因此，在病理技術工作中必須高度重視固定的質量。
二、組織固定的注意事項
1．及時取材：由于甲醛對組織的平均穿透速度只有0.8 mm/h，因此手術切除的送檢標本應及時切開進行取材，以便保證重要的鏡檢部位能及時地得到固定。
2．及時固定：完成取材的組織塊應立即投入固定液以便盡可能地保存組織細胞的形態結構和抗原性。
3．液量充分：一般情況下要求固定液的量應為組織體積的6～10倍。
4．適度固定：現代固定的要求是，在良好保存組織細胞形態結構的同時盡可能較好地保存組織細胞的抗原性。長時間的固定會導致某些組織抗原性的逐漸喪失，因
此，適時固定可以在保存細胞結構和抗原性之間取得必要的平衡。對于較大的送檢標本而言，在及時切開固定的基礎上，應盡可能在24
h以內取材進入組織脫水程序。
5．適宜溫度：低溫可以降低固定的速度，反之可以加快固定進程。在自動組織脫水機上可以施加恒定的溫度使得在有限的時間內可以完成固定過程。一般情況下應將固定溫度控制在36~38℃。
6．適當攪拌：在自動組織脫水機上可以通過使用攪拌和試劑循環功能使固定過程在標本與試劑充分接觸的條件下完成。
三、固定液的選擇
影響標本固定的因素很多，如組織與固定液的比例、固定時間、固定溫度等；除此之外，固定液本身也很重要，若所選固定液不當，細胞內蛋白質、脂類、核酸等成
分將會有不同程度地損失。固定劑最好隨配隨用，并注意其濃度和酸堿度。因此根據實際工作的目的，選用合適的固定液非常重要。下面是一些常用固定液的配制方
法及適用范圍。
1．單純固定液
(1)4％中性甲醛固定液：最常用的固定液，能滿足常規HE及免疫組化、PCR等工作。一般無特殊要求的病理標本均適用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以
pH
7．2～7．4的磷酸緩沖液為溶劑配制的，其固定效果及對組織抗原性的保存均優于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后應密封并保存在陰涼處，保存時間不
超過一個月。
甲醛(40%) 100 ml
無水磷酸氫二鈉 6.5 g
磷酸二氫鈉 4.0g
蒸餾水 900 ml
(2)乙醇固定液：使用時以80％～95％的濃度為宜，具有硬化、固定、脫水等作用，對組織滲透力較弱，因此很少單獨使用，但其保存組織中的核酸強于中性甲醛，故常用于有核酸操作的實驗或檢查，如果用于證明尿酸結晶和保存糖原，可用100%乙醇固定組織。
(3)4％的多聚甲醛：主要用于培養細胞的固定。
2．混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇－福爾馬林，AF)固定液：適用于皮下組織中肥大細胞的固定。該固定液有固定兼脫水作用，固定后的標本可直接入95％乙醇脫水。
甲醛(40％) 100 ml
95％乙醇 900 ml
(2)B5(醋酸鈉一升汞一甲醛)固定液：多用于固定淋巴組織。染色前應進行脫汞沉淀處理。
無水醋酸鈉 1.25 g
升汞 6.0 g
蒸餾水 90 ml
使用前加入甲醛 10 ml
(3)Bouin固定液：特別適用于睪丸活檢組織的固定。Bouin液對組織固定較均勻，收縮很少，不會使組織變硬變脆。需現配現用。
飽和苦味酸水溶液(約1.22%) 75 ml
甲醛 25 ml
冰醋酸 5 ml
(4)Carnoy固定液：穿透能力強，可很好的固定細胞質和細胞核，特別適合于固定外膜致密的組織，亦適用于糖原及尼氏小體的固定。
無水乙醇 60 ml
氯仿 30 ml
冰醋酸 10 ml
(5)Zenker固定液：經此液固定的標本，細胞核和細胞質染色頗為清晰，但成本較昂貴且需特殊處理汞。該固定液要避免接觸陽光，以免引起化學變化而失效。
升汞 5.0 g
重鉻酸鉀 2.5 g
硫酸鈉 1.0g
蒸餾水(加至) 100 ml
四、操作方法
臨床醫師切取標本后，應盡快將標本置于盛有足夠量固定液的容器內，盡量避免可能出現固定不及時或不充分導致標本干涸或腐敗，無法進行切片制作。病理科工作
人員驗收標本后，必須對臨床初步固定的標本及時進行規范的處理：對于穿刺及胃腸鏡所取的小標本，直接添加中性甲醛，添加的量應6～10倍于標本體積；對于
較大的手術切除標本應呈書頁狀切開、有包膜的標本切開固定，切開的厚度1
cm左右，為了保存標本的原有大體形態，切開時最好不要完全斷開，兩切面之間用脫脂棉或紗布隔開，然后放人6～10倍體積的固定液中完全淹沒。特殊標本特
殊處理：如脾臟或淋巴結等包膜較厚，固定劑滲透力有限，應切薄薄的一小片單獨固定，對于宮頸錐切標本及胃腸等空腔器官應及時釘板展開固定。固定到取材的時
間應視標本的大小及切面的厚度而定，小標本應不少于4 h,大標本不少于18 h。