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  • 發布時間:2019-03-30 15:59 原文鏈接: 組織培養常用液的配制實驗—pH調整液的配制實驗

    pH調整液的配制實驗

    試劑、試劑盒

    NaHCO3HEPES

    實驗步驟

    一、NaHCO3


    1.  常用的濃度有7.4%、5.6%、3.7%三種,配制時,用三蒸餾水溶解后,過濾除菌,分裝小瓶,蓋緊瓶塞,4 ℃冰箱或室溫下保存。

    2.  或用10 磅10 分鐘高壓蒸氣滅菌亦可;
    可能有部分NaHCO3被破壞,但操作簡單方便。

    3.  消毒后要迅速封上瓶口,以免CO2逸出。


    4.  調節溶液pH時,NaHCO3液要逐滴加入,并不時攪動培養液,以防加入過量,使pH值過度增高;如溶液內含有酚紅指示劑,可按顏色變化判定。當pH值超過后,可用高壓滅菌的10%醋酸溶液或通入CO2氣體方法調節。


    二、HEPES液


    HEPES可按照所需的濃度,直接加入到配制的培養液內,再過濾除菌,通常配制成500 mM的濃度


    1.  用200 ml雙蒸水溶解47.6 克HEPES,用1 N NaOH調節pH 至7.5—8.0;


    2.  過濾除菌后,分裝小瓶,室溫或4℃保存。


    HEPES的使用,由于細胞的代謝作用,培養液很快變酸成黃色,pH 值下降。另一方面,在細胞接種量少,生長緩慢時,pH值要上升。這些對細胞的生長都不利,可以及時更換培養液,但培養基中營養并未耗盡,因此只調pH即可。調pH除用NaHCO3外亦可用氫離子緩沖劑,它們具有能較長時間控制恒定的pH值的作用,HEPES就是其中的一種。HEPES具有較強的緩沖能力;使用最終濃度一般為10—50 mM,可以根據緩沖能力的要求而定。

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