實驗概要
本文介紹了組織微陣列(TMAs)的制作原理及基本操作流程。
實驗原理
組織微陣列原理是借鑒計算機平行分析的思維 ,對生物信號進行平行分析。利用微點陣技術 ,借助于機械手將成千上萬的組織片點陣固定于固相載體上,可進行常規 HE染色 ,也可以與標記的樣品進行聚合酶鏈反應、熒光原位雜交、免疫組織化學等方法 ,平行的檢測微陣列中每份標本的 DNA /RNA及蛋白質等表達 ,采用同一塊微陣列能夠完成大量的生物標本分析與形態學;基因型和表型特征相關性分析 ,進而獲得樣品分子數量和序列信息。技術原理：首先根據蘇木精；伊紅(HE)染色結果確定腫瘤的大小、類型、分級， 再確定預計取樣組織的位置，然后用專用穿刺細鋼針進行穿刺，將此柱狀物固定于膜具上。 每個標本間隔0.1mm，以0.4um 的厚度進行切片，將薄切片黏附于尼龍膜或載玻片等固體載體上，就制成了 TMAs隨著技術的進展，每個標本的直徑由最初的大于3mm縮小到0.6mm，使得在一個蠟塊上可以取樣 1000次以上。制成的 TMAs 可應用免疫組化、原位雜交的方法進行研究。TMAs技術也可應用于對細胞系的檢測。將所需檢測的細胞離心于Eppedorf管中，用甲醛等固定后用穿刺針取樣，即可用于制作TMAs。
實驗步驟
制作主要類型分為: 1.大規模cDNA微陣列；2.芯片外寡核苷酸合成；3.原位合成寡核苷酸制造芯片；4. 應用噴墨打印機技術制造芯片。
其制作過程為：
1. 將收集的病例組織固定，制作成供體蠟塊(Donor)切片、HE染色進行病理診斷和病變組織定位。
2. 根據所設計組織微陣列大小的需要在空白受體石蠟模塊 ( Recipient)上打孔。
3. 在定位好的供體蠟塊上打孔，鉆取所需組織芯 (Tissue Core) 轉移到受體石蠟塊上。
4. 受體石蠟切片，制作成組織微陣列切片(TMAs)用于相關的原位研究。
制備具體流程如下:
1. 首先在組織蠟塊庫中進行組織篩選和定位選擇組織塊(如制作胃癌微陣列 ,取胃癌的組織塊)，對目的蠟塊切面特定區域做標記。
2. 根據標記供體蠟塊部位用供體針 (包括兩個穿刺針:大針和小針 ),大針可對供體組織蠟塊精確地采樣 ,小針用于對受體蠟塊精確的打孔 ,其孔徑與采樣針內徑相同 ,這樣大針采樣品可以剛好打入受體蠟塊相應孔中 ,利用常規切片作參照,從蠟塊相應典型部位取組織芯 ,其直徑約 016～110 mm。
3. 將供體組織芯放入受體空白蠟模 ,每份標本在標記區域內取2條組織芯,統一而準確記錄每個樣本在二維陣列中的具體位置;重復上述操作,可制備出孔徑、孔距、孔深完全相同的陣列蠟塊。
4. 將陣列蠟塊放到52℃±0.15℃ 烤箱內烘烤2～3h,使蠟模既不熔化,又不產生氣泡和裂痕,關鍵是使供體組織條與受體蠟模完全融合且不移位 ,保護微陣列組織的平面性和完整性。
5. 切片前置于20℃冰箱中冷凍30 min,使組織蠟塊硬度和脆性達到一個良好契合點,該蠟塊可以連續3μm厚切片,可以切完成TMA組織片約200張。切片刀要鋒利,以保證每一塊組織芯均能被完整切下。使用蒸餾水裱片,避免水中含有任何雜質,水溫控制在38～40℃。撈片時速度應快 ,防止組織的漂移。敷貼在玻片等固相載體上,便可用于免疫組化或分子雜交等檢測。
6. 制作好的片子放烘箱中，烤好以后的片子放入專用盒 ,4℃冰箱保存。