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  • 發布時間:2020-09-01 14:26 原文鏈接: 組織芯片制備儀

      組織芯片技術是以形態學為基礎的分子生物學新技術,應用范圍涵蓋了整個生命科學中各個基礎研究、臨床研究、應用研究以及藥物開發的相關領域。憑借其省時、高效、誤差小等優點,自誕生以來就獲得了生命科學從業人員的熱切關注。

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      那么組織芯片到底是如何制備出來的呢?

      簡短截說,組織芯片制備就是通過組織芯片陣列儀細針打孔的方法,從眾多的組織蠟塊(稱為供體蠟塊,donor)中采集到數十至上百的圓柱形小組織(組織芯,tissue core),并將其整齊排列另一空白蠟塊(稱為受體蠟塊,recipient)中,而制成組織陣列塊。然后對組織組織陣列塊進行切片,再將切片撈片到載玻片上制成組織芯片。詳細制備步驟如下:

      芯片微陣列設計

      在構建組織芯片之前,應該預先計劃檢測多少樣本,然后相應地進行設計。對大多數研究來說,在一個常規的載玻片上放置60~100個樣本已經足夠了。當樣本超過100例時,上樣、切片、染色及研究各個步驟都要求相當熟練,并且由于樣本排列過于緊密,有可能導致芯片制作和研究失敗。因此在計劃檢測數百個到上千標本時可考慮多做幾個組織芯片。

      收集病理及相關蠟塊

      挑選出具有隨訪資料的不同發展階段的腫瘤組織蠟塊,根據HE切片對石蠟標本中有代表性的點進行標記,包括典型的腫瘤和相應的正常組織,以構建腫瘤組織芯片。

      TMA受體蠟塊制備

      取蠟塊制成長36mm*寬26mm*高17mm的空白蠟塊,在該蠟塊20mm×16mm范圍內設計10×8點組織陳列。組織四周預留0.5cm-0.7cm空間,用組織儀打孔制成TMA蠟塊。

      受體蠟塊打孔

      在組織芯片制作機上用細針對受體蠟塊打孔,孔徑以1~2mm比較適宜。同樣在供體蠟塊上標記的相應部位打孔采集組織芯,孔徑同樣為1~2mm。將組織芯轉移到受體模塊的孔中,每個組織芯之間的間距以0.2mm為佳。

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      為了防止在打點、切片、染色或免疫組化過程中出現漏點、滑片及掉片現象,每個樣本可以上樣1-2個點。

      TMA芯片蠟塊融合

      將構建好的TMA芯片蠟塊放在相宜的塑料盒子內,并嚴密固定防止移位。放入50℃溫箱中約10分鐘,在蠟將要完全溶解前,取出于室溫下冷卻,使受體模塊的蠟與新插入的小圓柱狀組織溶為一體,取下蠟塊,于4℃冰箱中保存備用。

      切片

      切片前,蠟塊需在4℃中預冷4h左右,然后夾在切片機上進行修正,等修到全部組織完整為止。

      用-20℃預冷冰袋貼在蠟塊上5-10min左右,快速連續切片30-50張左右,再用冰袋冷凍組織塊,或直接在冰凍切片機內進行,直至將組織切完為止。

      將3 μm連續切片分別漂在涼水中,讓其自然展開,按順序將切片轉移至45℃的溫水中展片2min左右,將其貼在防脫載玻片上晾干,60℃中烤片2h左右, -20℃保存備用。


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