時間分辯熒光分析法
1）銪熒光檢測法
標記靶細胞
1．EuCl3的制備：稱取58.08mg Eu2O3，用少量1N HCl攪拌至溶解，再用1N NaOH調節pH至4.0。加雙蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存備用。
2．用預冷的標記液將靶細胞濃度調整到5×106/ml，加50μl 10mg/ml硫酸葡聚糖，置冰浴中20分鐘，其間搖晃數次。
3．加入30μl 100mmol/L CaCl2溶液終止反應5分鐘。
4．用含2mmol/L CaCl2的RPMI-1640培養液洗滌細胞5次。用含10％小牛血清的RPMI-1640培養液將靶細胞配成5×104/ml。
檢測方法
1．在96孔圓底細胞培養板中加入靶細胞懸液，每孔加100μl。
2．向各孔加100μl效應細胞，效應細胞與靶細胞的比例根據要求而定，通常為5：1～20：1。自然釋放孔不加效應細胞只加100μl培養液，最大釋放孔中加100μl 0.5％ Triton X-100。每個實驗置三個復孔。
3．置37℃ 5％ CO2的二氧化碳培養箱中培養3小時。
4．從每孔吸出20μl上清液，對應加入另一塊96孔酶標板中，向第二塊板每孔加200μl增強液。室溫中混合5分鐘。在時間分辯熒光分析儀上測定各孔的熒光強度。同時做EuCl3的標準曲線：用0.05mol/L pH7.0檸檬酸緩沖液配制10倍梯度
5．特異性殺傷活性計算：殺傷活性（％）＝[（實驗組熒光強度－自然釋放組熒光強度）/（最大釋放組熒光強度－自然釋放組熒光強度）]×100％
2）用時間分辯熒光檢測法同時檢測NK細胞對三種靶細胞的細胞毒性
標記靶細胞
1．取107靶細胞，用洗滌液（含93mmol/L NaCl, 5mmol/L KCl和2mmol/L MgCl2的50mmol/L pH7.4 Hepes，雙蒸水配制）洗滌一次。小心吸去上清液，用1ml標記液（洗滌液中加0.5mg/ml磷酸葡聚糖和0.06mmol/L Eu3+或2mmol/L Sm3+或0.2mol/L Tb3+，以及比鑭系離子濃度高5倍的DTPA）懸浮細胞。將細胞懸液置冰上20分鐘，每3分鐘上下吹打1次。
2．加入2ml終止液（洗滌液中加2mmol/L CaCl2和10mmol/L葡萄糖），終止標記反應并使細胞膜上的孔隙封閉。5分鐘后用終止液洗滌3次，用細胞培養液洗滌3次，每次洗滌時離心500×g 10分鐘。
3．用細胞培養液將細胞配成1.2×105/ml或5×104/ml備用。
NK細胞毒試驗
1．取96孔圓底細胞培養板，每孔加3中標記靶細胞懸液各0.033ml和0.1ml不同濃度的NK細胞，使效靶比從100：1到6：1。自發釋放對照中不加效應細胞，只加0.1ml細胞培養液。最大釋放對照中不加效應細胞，加0.1ml 1％Triton X-100。每種處理重復3孔。
2．在37℃ 5％ CO2飽和水汽二氧化碳培養箱中培養4小時。
3．離心1 500×g 10分鐘。每孔取20μl上清液對應轉移到另一塊96孔平底細胞培養板中。每孔加200μl Delfia增強液，用下表的條件測定Eu3+和Sm3＋的熒光強度。
循環時間（ms） | 滯留時間（ms） | 計數時間（ms） | 發射波長（nm） | |
Eu3＋ | 1 | 0.4 | 0.4 | 613 |
Sm3＋ | 1 | 0.05 | 0.1 | 643 |
Tb3＋ | 2 | 0.5 | 1.4 | 545 |
4．用下式計算特異性殺傷活性：殺傷活性（％）＝[（實驗組熒光強度－自然釋放組熒光強度）/（最大釋放組熒光強度－自然釋放組熒光強度）]×100％
3）用熒光增強配體標記的靶細胞檢測CMC活性
1．標記靶細胞：在1×106/ml K562細胞中加入BA-TDA到10μmol/L，37℃標記30分鐘。用洗滌液（137mmol/L NaCl，4.2mmol/L NaHCO3，5mmol/L KCl，0.44mmol/L KH2PO4，1.2mmol/L TES pH7.4）洗滌細胞5次。用細胞培養液將細胞配成5×104/ml。
2．取96孔圓底細胞培養板，每孔加0.1ml標記靶細胞懸液和0.1ml不同濃度的NK細胞，使效靶比從100：1到6：1。自發釋放對照中不加效應細胞，只加0.1ml細胞培養液；最大釋放對照中不加效應細胞，加0.1ml 1％ Triton X-100。每種處理重復3孔。
3．在37℃ 5％ CO2飽和水汽二氧化碳培養箱中培養4小時。
4．離心1500×g 10分鐘。每孔取20μl上清液對應轉移到另一塊96孔平底細胞培養板中。第二塊板每孔加180μl Eu3＋溶液，搖晃5分鐘后用時間分辯熒光分析儀檢測熒光強度。計算殺傷活性。