1、將長滿細胞的培養瓶中原來的培養液棄去。
2、加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底細胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移，原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時將胰酶棄去，加入10ml培養液終止消化。
觀察消化也可以用肉眼，當見到瓶底發白并出現細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。
4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實踐培養液塞好橡皮塞，置37℃下繼續培養。第二天觀察貼壁生長情況。
附：消化液配制方法：
稱取0.25克胰酶蛋白酶（活力為1：250），加入100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，濾器過濾除菌，4℃保存，用前可在37℃下回溫。
胰酶溶液中也可加入EDTA，使最終濃度達0.02%。