細胞傳代培育的辦法

一、原理

細胞在培育瓶長成細密單層后，已基本上飽滿，為使細胞能持續生長，一起也將細胞數量擴展，就必須進行傳代（再培育）。

傳代培育也是一種將細胞種保存下去的辦法。一起也是使用培育細胞進行各種實驗的必經進程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經消化后才干分瓶。

二、材料和試劑

1、細胞：貼壁細胞株

2、試劑：0.25％胰酶、1640培育基（含10％小牛血清）

3、儀器和器材：倒置顯微鏡，培育箱、培育瓶、吸管、廢液缸等

三、操作過程

1、將長滿細胞的培育瓶中本來的培育液棄去。

2、參加0.5—1ml 0.25％胰酶溶液，使瓶底細胞都浸入溶液中。

3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下調查細胞。跟著時刻的推移，原貼壁的細胞逐步趨于圓形，在還未漂起時將胰酶棄去，參加10ml培育液停止消化。

調查消化也可以用肉眼，當見到瓶底發白并呈現細針孔空地時停止消化。一般室溫消化時刻約為1—3分鐘。

4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實踐培育液塞好橡皮塞，置37℃下持續培育。第二天調查貼壁生長情況。

附：消化液制造辦法：

稱取0.25克胰酶蛋白酶（活力為1：250），參加100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，濾器過濾除菌，4℃保存，用前可在37℃下回溫。

胰酶溶液中也可參加EDTA，使終究濃度達0.02％。