細胞馮庫薩（VON KOSSA）染色試劑盒產品說明書（中文版）
主要用途
細胞馮庫薩（VON KOSSA）染色試劑是一種旨在使用銀還原技術，分析固定處理的細胞樣本中鈣沉積現象的權威而經典的技術方法。該技術經過精心改良VON KOSSA方法、成功實驗證明的。主要適用于動物原生代或培養細胞的鈣沉積和鈣化結節檢測。廣泛用于骨細胞或組織病理生理的研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。
技術背景
鈣鹽變化是骨細胞增殖分化和骨組織成骨潛能的標志之一。通過嗜銀染色，鈣離子受到強光還原，由金屬銀沉積取代，呈現黑色。
產品內容
清理液（Reagent A） 250毫升
固著液（Reagent B） 10毫升
染色液（Reagent C） 10毫升
平衡液（Reagent D） 10毫升
產品說明書 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent C），避免光照；有效保證6月
用戶自備
核固紅復染試劑盒（40011）：用于常規染色后復染
60瓦燈：用于還原鈣離子
小型染色缸：用于細胞染色操作
光學顯微鏡：用于細胞染色后觀察分析
實驗步驟
操作一：細胞載玻片染色
樣本固著處理
取出待測的細胞載玻片
小心加上200微升清理液（Reagent A）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面
小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
小心加上200微升固著液（Reagent B），鋪滿整個樣品表面
室溫下，孵育10分鐘
小心移去載玻片上的固著液（Reagent B）
小心加上200微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
重復實驗步驟7至8一次
二、樣本染色處理
小心加上200微升染色液（Reagent C），鋪滿整個載玻片樣品表面
室溫下置于太陽光直射或60瓦燈直射孵育60分鐘；或直至可見黑色
小心移去載玻片上的染色液（Reagent C）
室溫下，小心將載玻片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
三、 樣本復染處理
小心加上200微升平衡液（Reagent D）在載玻片上，鋪滿整個載玻片樣品表面
室溫下孵育5分鐘（注意：平衡液（Reagent D）具有褪色調節作用）
小心移去載玻片上的平衡液（Reagent D）
室溫下，小心將載玻片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
樣本復染處理（核固紅）
放上蓋玻片或封片
即刻在一般光學顯微鏡下觀察：鈣沉積陽性細胞呈現黑色（如果復染：細胞質呈現粉紅色，細胞核呈現紅色）
操作二：24孔細胞培養板染色
一、樣本固著處理
1．小心抽去24孔細胞培養板里的培養液
2．每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗生長中的細胞表面
3．小心抽去每孔里的清理液（Reagent A）
4．每孔加入400微升固定液（Reagent B），覆蓋整個生長表面
5．在室溫下孵育10分鐘
6．小心抽去固定液（Reagent B）
7．每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗細胞表面
8．小心抽去清理液（Reagent A）
9．重復實驗步驟7和8兩次
二、樣本染色處理
小心加上400微升染色液（Reagent C），覆蓋整個生長表面
室溫下置于太陽光直射或60瓦燈直射孵育60分鐘；或直至可見黑色
小心抽去染色液（Reagent C）
室溫下，小心加入400微升清理液（Reagent A）
室溫下孵育2分鐘
小心抽去清理液（Reagent A）
三、 樣本復染處理
小心加上400微升平衡液（Reagent D），覆蓋整個生長表面
室溫下孵育5分鐘
小心抽去平衡液（Reagent D）
小心加入400微升清理液（Reagent A）
室溫下孵育2分鐘
小心抽去清理液（Reagent A）
樣本復染處理（核固紅）
即刻在一般光學顯微鏡下觀察：鈣沉積陽性細胞呈現黑色（如果復染：細胞質呈現粉紅色，細胞核呈現紅色）
注意事項
本產品為50次（細胞載玻片）和25次（1個24孔板）操作
操作時，須帶手套
所有操作在室溫下進行
試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面
樣品染色避免過度，肉眼可見黑色即可終止染色
建議使用核固紅復染試劑盒（40011），增強染色對比度
細胞染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察
本公司提供系列組織細胞金屬元素染色試劑產品
質量標準
本產品經鑒定性能穩定
本產品經鑒定顯色清晰
來源：上海一基實業有限公司
聯系電話：021-61119791
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