DNA聚合酶或Klenow大片段介導的原位缺口平移（ISNT）
切片常規脫蠟，梯度乙醇復水化。
將切片組織浸入2×SSC液中，80℃，20min，然后蒸餾水沖盡。
0.5%胃蛋白酶（pH2.0）37℃消化0～20min，PBS洗盡。
用濾紙擦干組織塊周邊液體放入濕盒組織切片上滴加緩沖液A，5min。緩沖液A：50mmol/L Tris-HCl， 5mmol/L MgCl2， 10mmol/L β-巰基乙醇，0.005％BSA，pH7.5。
棄去緩沖液A，滴加標記液約50μl，25℃溫育1h。標記反應液：0.005mmol/L dNTP， 0.005mol/L biotin-16-dUTP， 25U/ml Klenow大片段。
PBS漂洗2次，各3min。
內源酶阻斷劑阻斷15min。
PBS洗2次，各3min。
滴加HRP-avidin覆蓋組織，室溫下30min。
PBS洗2次，各3min。
DAB-H2O2顯色約5min。
流水沖洗后，蘇木素復染1min。常規脫水，透明，封片。
陰性對照片在第5步改加不含Klenow的標記液，余同。
TdT介導的dUTP缺口末端標記技術（TUNEL）
細胞凋亡中，
染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產生大量的粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標記到DNA的3'-末端，從而可進行凋亡細胞的檢測，這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記法（terminal
-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling，
TUNEL）。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。TUNEL實際上是分子生物學與形態學相結合的研究方法，對完整的單個凋亡細胞核或凋亡小體進行原位染色，能準確地反應細胞凋亡典型的生物化學和形態特征，可用于石蠟包埋組織切片、冰凍組織切片、培養的細胞和從組織中分離的細胞的細胞形態測定，并可檢測出極少量的凋亡細胞，因而在細胞凋亡的研究中被廣泛采用。
切片常規脫蠟，復水，后續過程在濕盒內進行。
3%的H2O2阻斷內源性辣根過氧化物酶30min。
0.15mol/L的PBS洗2次，每次5min。
切片浸泡在2×SSC 80℃ 20min。
0.15mol/L的PBS洗2次，每次5min。
蛋白酶K或胃蛋白酶消化0～20min。
0.15mol/L的PBS洗2次，每次5min。
TdT緩沖液孵育10min。
TdT反應液37℃孵育1h。
切片浸泡在2×SSC溶液10min，以終止反應。
0.15mol/L的PBS洗2次，每次5min。
鏈卵白素標記的辣根過氧化物酶孵育30min。
0.15mol/L的PBS洗2次，每次5min。
0.04%的DAB顯色5～10min，鏡下控制時間。
蘇木素復染3～5min，常規復水，透明和封片。
研究證明，TUNEL法的敏感性遠高于ISNT，尤其對早期凋亡的檢測，TUNEL更為合適。