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  • 發布時間:2019-04-26 20:50 原文鏈接: 細胞的分裂指數測定

    一、原理
    體外培養細胞生長、分裂繁殖的能力,可用分裂指數來表示。它與生長曲線有一定的聯系,如隨著分裂指數的不斷提高,細胞也就進入了指數生長期。
    分裂指數指細胞群體中分裂細胞所占的百分比,它是測定細胞周期的一個重要指標,也是不同實驗研究選擇細胞的重要依據。
    二、儀器、用品與試劑
    1、儀器與用品:CO2培養箱、普通顯微鏡、細胞培養血、蓋玻片、吸管
    2、試劑:培養液、胰酶、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液
    三、操作步驟
    1、消化細胞,將細胞懸液接至內含蓋玻片的培養皿中。
    2、CO2培養箱中培養48小時,使細胞長在蓋片上。
    3、取出蓋片,按下列順序操作:
    PBS漂洗3分鐘→甲醇:冰醋酸=3:1固定液中固定30分鐘→Giemsa液染色10分鐘→自來水沖洗。
    4、蓋片晾干后反扣在載玻片上,鏡檢。
    5、計算:
    分裂指數=分裂細胞數/總細胞數×100% 
    四、注意事項
    操作時動作要輕,以免使蓋片上的細胞脫落。
    附:Giemsa染液配制:
    稱Giemsa粉末0.5克,加幾滴甘油研磨,再加入甘油(使加入的甘油總量為33ml)。56℃中保溫90—120分鐘。加入33ml甲醇,置棕色瓶中保存,此為Giemsa原液。
    使用時按要求用PBS稀釋。一般稀釋10倍。

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