| 實驗步驟 | 一、材料、儀器設備及試劑
1. 材料:黃瓜子葉,蘿卜子葉。
2. 儀器設備:電子分析天平,分光光度計,恒溫培養箱,恒溫水浴鍋,25 ml容量瓶,25 ml刻度試管,試管架,移液管,黃瓜子葉的培養皿(直徑5cm),瓷盤,刀片,尖頭鑷子,濾紙,吸耳球等。
3. 試劑及配制:100μg· ml-16-BA溶液,95﹪乙醇 ,CaCO3粉末。
100μg· ml-16-BA母液配制:準確稱取6-BA 10mg, 加幾滴1mol·L-1HC1溶解(可稍加熱溶解),然后慢慢加入蒸餾水稀釋后定容至100 ml。
二、實驗步驟
1. 黃瓜幼苗的培養
精選黃瓜種子,播入墊有濾紙的瓷盤中,加蒸餾水使之濕潤(注意種子不能漬水),待種子萌發后,在光下培養2~3d左右,直至子葉綠化。備用。
2. 系列濃度6-BA溶液配制:吸取100μg· ml-16-BA母液,稀釋成10、5、0.5
μg· ml-1的系列濃度溶液。
3. 離體黃瓜子葉的培養
3.1取4套培養皿,編號,每套培養皿各墊一張濾紙,分別作0.5、5、10μg· ml-1的6-BA溶液和蒸餾水(CK)4個處理,即為第一組。
3.2 選取子葉大小、生長一致的黃瓜幼苗20株,每處理5 株(10片子葉),用刀片切下不附帶葉柄的子葉,分別稱取鮮重,將數據記入下表中。然后將子葉放入第一組相應編號的培養皿中,分別加入不同濃度的6-BA溶液3 ml, 對照(CK)加蒸餾水3 ml。蓋上培養皿蓋,置于暗處,溫度25-28℃培養3 d 。
另取與第一組相同的黃瓜幼苗20株,用刀片切下不附帶葉柄的子葉作第二組,直接用來測定葉綠素含量。
4. 第二組黃瓜子葉葉綠素含量的測定
4.1葉綠素的提取
取3支25 ml刻度試管,編號。稱取第二組的黃瓜子葉三份(3個重復),每份10片子葉,然后放入相應編號的刻度試管中,各加入少量CaCO3粉及95﹪乙醇3-4 ml,用玻棒小心將子葉搗碎后,將試管放入45℃恒溫水浴提取葉綠素30min左右,直到子葉碎片無色為止,用濾紙過濾于25 ml容量瓶中(如殘渣仍帶綠色,可再加幾 ml乙醇繼續提取,直至殘渣無綠色)。濾紙上的色素用乙醇慢慢點滴清洗入容量瓶中,最后定容至刻度,搖勻,待測。
4.2 葉綠素含量的測定
在652nm波長處,以95﹪乙醇為空白對照,測定葉綠素提取液的吸光度(A值)。并按公式計算出葉綠素含量。即為培養前子葉的原始葉綠素含量。
5. 第一組黃瓜子葉葉綠素殘留量的測定
第一組黃瓜子葉在暗處培養3d后,按上述第(4)步驟方法分別測定各處理子葉葉綠素含量,并按公式計算出各處理葉綠素含量,即為暗培養后子葉葉綠素含量。
三、結果計算
葉綠素含量計算公式:
 四、記錄結果
按下表記錄實驗數據并分析結果
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