二、 蘇丹黑B染色（sudan black B,SBB）
【原理】蘇丹黑B（sudan black B,SBB）是一種脂溶性重氮染料，能溶解于細胞內含脂質的結構中，使脂類物質呈現棕黑或深黑色。
【染色結果及正常血細胞反應】陽性結果為細胞中出現棕黑或深黑色顆粒。
1． 各種血細胞SBB染色結果與POX染色大致相似。
2． 分化差的原始粒細胞為陰性，分化較好的原始粒細胞在核旁Golgi器區域開始出現陽性顆粒，隨細胞分化成熟陽性顆粒增大增粗。
3． 嗜酸粒細胞陽性顆粒粗大，染色偏棕色，顆粒周邊染色深，中心為蛋白質組成的不著色區。
4． 嗜堿細胞陰性或陽性，陽性顆粒大小不一。
5． 單核細胞染色陰性或弱陽性，顆粒細小，分布彌散。
6． 淋巴細胞、幼紅細胞、巨核細胞、漿細胞、高雪細胞陰性。網狀細胞、海藍細胞陰性或弱陽性。
【臨床意義】在急性白血病的鑒別意義上蘇丹黑B染色與POX基本一致。
1． 陽性強弱次序在急性白血病與POX基本一致，陽性強弱次序相同，即M3> M2b> M2a> M6(粒)> M4>M1>M5>HAL>ALL。
2． 蘇丹黑B染色比POX陽性顆粒出現早，反應強，更敏感。但國內外均有報道ALL可呈現弱陽性，顆粒細小，可能是線粒體酯酶所致，因此不可僅憑蘇丹黑B染色區分形態上難以鑒別的ALL和ANLL，如按傳統FAB分型的ALL-L2與ANLL-M1。 返回
三、酯酶染色(Esterase)
酯酶屬水解酶，是一組在不同pH條件下，水解各種脂肪族或芳香族酯類的酶。根據酯酶存在的細胞類型、催化底物和pH不同，可分成特異性酯酶和非特異性酯酶兩大類。水解短鏈脂肪酸酯為非特異性酯酶，萘AS-D氯乙酸鹽作底物為特異性酯酶。人血細胞含有九種酯酶同工酶，不同的血細胞所含同工酶亦不相同。
(一) 特異性酯酶(naphthol AS-D chloroacetate esterase, SPE，CE)
【原理】細胞內的氯乙酸AS-D萘酚酯酶(naphthol AS-D chloroacetate
esterase)，可將氯乙酸AS-D萘酚進行水解，釋放出AS-D萘酚，后者與重氮鹽偶聯產生不溶性有色沉淀，定位于胞質內。國際血細胞標準化委員會1985年推薦固紫醬GBC法(Fast
garnert GBC salt)和新品紅方法 (New Funchisn
，前者更為常用，產生的沉淀物為紅色。CE通常看成是粒細胞及肥大細胞的標志酶，很多報道都強調了它對粒細胞有較強的特異性，因此被稱作特異性酯酶。
【染色結果及正常血細胞反應】細胞質中出現紅色沉淀者為陽性反應。
1． 該酶主要存在于中性粒細胞中。
2． 原始粒細胞一般陰性，少部分可見弱陽性反應。自早幼粒至成熟中性粒細胞均呈陽性反應。以早幼粒和中幼粒反應最強，陽性物充滿胞漿，酶活性并不隨著細胞的成熟而增強，而是減弱。
3． 嗜堿粒細胞陰性，個別弱陽性。嗜酸粒細胞陰性或弱陽性。
4． 單核細胞多為陰性，偶呈弱陽性反應，陽性物為顆粒散在分布。
5． 淋巴細胞通常陰性，但自然殺傷（NK）細胞陽性率約在50%左右。
6． 幼紅細胞、巨核細胞、血小板、高雪細胞和尼曼－匹克細胞、漿細胞陰性。海藍細胞陰性或弱陽性。組織嗜堿細胞（肥大細胞）強陽性（圖2）。
【臨床意義】特異性酯酶染色是臨床常用的輔助鑒別急性白血病類型的化學染色方法，主要用于急性粒細胞白血病與其他白血病的鑒別。
1． 急性粒細胞白血病：原粒細胞多呈陽性，少數陰性，因此陰性結果不能排除急性粒細胞白血病可能。M3異常早幼粒細胞呈強陽性，易見柴束樣結晶。部分M2b細胞核的凹陷處呈團塊狀反應（圖3）。髓系白血病中Auer小體特異性酯酶可呈陽性。
2． 慢性粒細胞白血病急性變時酶活性增強。
3． 單核細胞白血病時原始及幼稚單核細胞多為陰性，偶呈弱陽性反應，陽性物為顆粒散在分布。急性粒－單細胞白血病部分白血病細胞陽性，部分陰性。
4． 急性淋巴細胞白血病陰性，但自然殺傷（NK）細胞白血病50％陽性,可作為大顆粒淋巴細胞白血病的診斷依據之一（圖4）。
5． 急性巨核細胞白血病陰性。
圖2組織嗜堿細胞CE強陽性 圖3 M2b CE部分呈團塊狀反應
圖4 NK細胞50%CE為陽性
(二)非特異性酯酶(Non-Specific Esterase)
非特異性酯酶是一組在酸性、中性和堿性pH條件下，水解各種短鏈脂肪酸酯或芳香族酯的酶。幾乎存在于所有血細胞，包括巨核細胞、漿細胞，甚至上皮細胞的溶酶體內。根據pH不同分中性非特異性酯酶；酸性非特異性酯酶；堿性非特異性酯酶。底物有：α-醋酸萘酚酯酶
(α-Naphthyl acetate esterase, α-NAE)；萘酚AS醋酸酯酶 (Naphthyl AS acetate
esterase, NASAE)；萘酚AS-D醋酸酯酶 (Naphthyl AS-D acetate esterase,
NAS-DAE)；α-丁酸萘酚酯酶 (α-Naphthyl Batyrate esterase, α-
NBE)。重氮鹽有：堅牢藍B；固藍BB；六偶氮付品紅等。
1. α-醋酸萘酚酯酶(α-Naphthol acetate esterase，α-NAE)
【原理】在中性條件下，血細胞內的α-萘酚醋酸酯酶將醋酸萘酚水解，產生酚，再與重氮鹽偶聯，產生不溶性的有色沉淀。本試驗常用的重氮鹽為六偶氮付品紅，形成的沉淀為紅色。α-萘酚醋酸酯酶存在于單核細胞、粒細胞和淋巴細胞中，因此是一種中性非特異性酯酶。單核細胞的陽性反應可被NaF抑制，因此常同時作NaF抑制試驗。
【染色結果及正常血細胞反應】細胞質中出現棕紅色或暗紅色顆粒狀或彌散絮狀沉淀者為陽性反應。
1． 原始單核細胞α-NAE陽性率及強度低，幼稚單核細胞可呈陰性、弱陽性和強陽性，成熟單核細胞陽性（圖5）。陽性物顏色鮮艷呈細小顆粒彌散狀，加NaF后陽性率及指數明顯降低或為陰性。
2． 粒細胞一般為陰性或弱陽性反應，不被NaF抑制。
3． T淋巴細胞呈陽性反應，為點狀陽性沉淀。B淋巴細胞陰性。
4． 有核紅細胞多為陰性，少數弱陽性。
5． 巨核細胞、血小板α-NAE呈陽性；網狀細胞α-NAE呈較強的陽性反應，陽性物多呈彌散狀；漿細胞α-NAE呈強陽性，陽性反應物顆粒粗大或呈珠狀；高雪、海蘭等一些非造血細胞為強陽性反應且不被NaF抑制。
圖5 單核細胞α-NAE強陽性
【臨床意義】α-萘酚醋酸酯酶反應常被用于急性單核細胞白血病與急性粒細胞白血病的鑒別。
1． 急性單核細胞白血病白血病細胞呈強陽性反應，酶活性可被NaF抑制。
2． 急性粒－單細胞白血病部分白血病細胞陽性，部分陰性，氟化鈉抑制率與兩類細胞的比例相關。
3．
急性粒細胞白血病呈陰性或弱陽性，不被NaF抑制。M3部分可呈強陽性反應，陽性物彌散型分不清顆粒，不被NaF抑制。也用于T細胞型和B細胞型急性淋巴細胞白血病的鑒別，前者為陽性反應，后者為陰性反應。但T細胞型慢性淋巴細胞白血病多呈陰性，故不能用于區別T與B細胞型慢性淋巴細胞白血病。
氟化鈉抑制指反應液中加入氟化鈉（終濃度15mg/10ml），抑制率大于等于50％為受抑制，計算公式為：氟化鈉抑制率＝（抑制前陽性率或陽性積分－抑制后陽性率或陽性積分）÷抑制前陽性率或陽性積分×100％。單核細胞、巨核細胞、血小板、漿細胞受抑制；淋巴細胞、粒細胞、有核紅細胞不受抑制。有時α-萘酚醋酸酯酶反應可出現假陽性，有時細胞的陽性程度弱，如非差異顯著，抑制情況難以判斷，因此在試驗操作和結果判斷時都須謹慎。
2.α-丁酸萘酚酯酶染色(alpha—naphthyl butyrate esterase，α-NBE)
【原理】：血細胞中的α-丁酸萘酚酯酶，在PH中性的條件下，能將基質液中的α-丁酸萘酚水解產生α-萘酚，后者與重氮鹽偶聯形成不溶性沉淀，定位于胞質內。常用的重氮鹽為堅牢紫醬GBC，形成的沉淀為紅色。α-NBE主要存在于單核細胞中，陽性反應可被氟化鈉抑制，其他系列細胞的陽性反應不被抑制。
【染色結果及正常血細胞反應】陽性反應為細胞質中出現紅色沉淀。
1． 原粒細胞和早幼粒細胞呈陰性反應，中幼粒及晚幼 粒細胞可見弱陽性反應，不被氟化鈉抑制。
2． 原始和幼單核細胞α-NBE多呈強陽性反應，能被氟化鈉抑制，部分可見弱陽性和陰性。
3． 外周血B淋巴細胞陰性，T淋巴細胞和非T非B淋巴細胞可呈陽性。
4． 巨核細胞、幼紅細胞、漿細胞陰性，少數可見弱陽性反應。
5． 組織細胞可呈強陽性，但不被氟化鈉抑制。
【臨床意義】α-萘酚丁酸酯酶較其它底物對于單核細胞特異性強，靈敏度差。
1． 單核細胞白血病白血病細胞α-NBE多呈強陽性反應(圖6)，能被氟化鈉抑制。急性粒－單細胞白血病部分白血病細胞陽性，部分陰性。
2． 急性粒細胞白血病、急性淋巴細胞白血病一般呈陰性, 后者少數呈灶性細顆粒陽性。
3． 惡性組織細胞病可呈強陽性，但不被氟化鈉抑制。
4． 毛細胞白血病α-NBE呈細小顆粒彌散分布的陽性反應，亦可聚成半月形的粗顆粒，不被氟化鈉抑制。
5． 巨核細胞陰性，少數可見弱陽性反應。用此實驗來區別單核細胞和巨核細胞。
圖6 單核細胞α-NBE多呈強陽性
3.醋酸AS-D萘酚酯酶(Naphthol AS-D acetate esterase，AS-D NAE)
【原理】血細胞內的醋酸AS-D萘酚酯酶(Naphthol AS-D acetate esterase，AS-D
NAE)在PH中性的條件下水解基質液醋酸AS-D萘酚，釋放出AS-D萘酚，后者與重氮鹽偶聯形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞內酶所在的部位。常用重氮鹽堅牢藍BB，形成的有色沉淀為藍色。醋酸AS-D萘酚酯酶存在于單核細胞、粒細胞和淋巴細胞中，因此是一種中性非特異性酯酶。單核細胞的陽性反應可被NaF抑制，因此常同時作NaF抑制試驗。