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  • 發布時間:2022-03-08 15:22 原文鏈接: 細胞原代培養的操作要點有哪些?

      1、混勻操作要領

      (1)火焰消毒吸管,用Hanks液冷卻和濕潤管內壁(這是因為剛分離的組織細胞易粘在管壁上)

      (2)吸管頭插入管底

      (3)用吸管反復輕輕吹打組織塊

      2、器械的使用

      (1)用工作臺消毒鑷子取浸泡在酒精中消毒的器械。

      (2)器械置無菌干紗布內嚓一下。迅速通過火焰,冷卻后使用。

      (3)用過的器械置另一加蓋的器皿中再消毒。

      (4)器械按浸泡消毒的順序使用。

      (5)各套再消毒器械不可混用。

      3、除去組織塊多余水分

      用吸管將組織塊推向青霉素瓶一角,然后將有組織塊的瓶面翻向上方,吸去流向對側的多余水分。

      注意:多余水分若不除去,會使組織塊剪切不細,消化后的細胞懸液清亮(細胞數少),并可見消化液中有線狀或絮狀物漂浮。

      4、細胞計數

      (1)用吸管混勻待計數的細胞懸液。

      (2)將一小滴細胞懸液從蓋玻片與載玻片交界部位滴入細胞計數池中。

      (3)沉降1分鐘,低倍鏡下計數血球計數板四大中格的結構完整的細胞,小細胞團計數為1。

      (4)計數時,如果細胞壓在格上,則數上不數下,數左不數右。然后按下式計算出每毫升懸液中的細胞數。

      (四大中格細胞數/4)*10000=細胞數/毫升

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