細胞同步化實驗

細胞

諾考達唑

培養瓶試管

1. 往 175 cm² 規格的培養瓶中接種細胞，培養至匯合率達 60%~80%。

2. 用力敲打培養瓶 10 次，然后吸去培養液，以去除松散貼壁的細胞，死細胞和細胞碎片。

3. 加入 10 ml 含 0.05 mg/ml 諾考達唑的預溫培養基，重新放回溫箱孵育 4 小時。

4. 將培養瓶中的培養液轉入無菌試管中。

5. 中等用力拍擊培養瓶以剝離有絲分裂細胞，用 5 ml 原來的含諾考達唑培養液涮洗瓶子兩次，再轉入一支新的試管中。收集到的有絲分裂的細胞能室溫放置，然后處理其余的培養瓶。每只瓶子的細胞產量為 3X10⁵~4X10⁶ 。

6. 合并所有瓶中的有絲分裂細胞，分析有絲分裂細胞的百分比。

7. 要得到 G1 期細胞，600 g，37℃ 離心 8 分鐘，用不含諾考達唑的培養基于 37℃ 重懸細胞，每 175 cm² 規格培養瓶接種 1X10⁷ 細胞，培養 3~4 細胞，收獲。