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  • 發布時間:2019-04-02 15:06 原文鏈接: 細胞同步化實驗_同步優于G1/S期

    實驗材料

    細胞培養物

    試劑、試劑盒

    胸苷

    儀器、耗材

    流式細胞計量儀

    實驗步驟

    一、雙胸苷同步化法

    1. 往指數生長期細胞培養物中加入 2 mmol/L 的胸苷,孵育 12 小時。

    2. 600 g 離心,去含胸苷培養基,換上正常培養基輕輕重懸細胞,讓細胞生長 10~12 小時使完全走出 S 期。

    3. 加入胸苷至 2 mmol/L,孵育 12~14 小時。

    4. 600 g 離心,去含胸苷培養基,換上正常培養基釋放同步化細胞。

    5. 取樣,用流式細胞計量儀監測細胞通過 S 期的進程。

    二、含羞草氨酸俘獲法

    1. 往指數生長期細胞中加入腺苷至終濃度為 2 mmol/L,孵育 12 小時。

    2. 600 g 離心,去含胸苷培養基,用正常培養基輕輕重懸細胞,培養 10~12 小時讓其走完 S 期。

    3. 加入終 400 μm 的含羞氨酸終止細胞生長。

    4. 繼續培養 12~14 小時,讓細胞走完 G1 期,止于 G1/S 邊境。

    5. 撤換含羞草氨酸培養基,于 37℃ 用 DMEM 培養基洗涮細胞,加入預溫至 37℃ 的完全生長培養基讓細胞釋放生長。

    6. 取樣,用流式細胞計量儀監測細胞通過 S 期的進程。

    展開


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