2 數據分析
MiniMax 細胞計數儀的透射光模塊可以從自動聚焦得到更好的圖像效果。SoftMax Pro 軟件中的“Field Analysis”能進行自定義分析從而鑒別細胞重疊的部分。我們應用一種特殊的鑒別方法來區分目標球體和其余物體，如殘渣和個體細胞，從而在后續的分析中予以去除 (Figure 2, A and E)。最后，我們選擇感興趣的區域并從圖像中去除不想要的物體。在綠色和紅色熒光通道中，球體可以通過“Object Count”模式中大小和與背景相對熒光強度的區別被輕易的篩選出來 (Figure 2, B-D, F-G)。然后運用SoftMax Pro 軟件計算圖像的“% Area coverage”和球體的“Object Area” (μm2)。圖像的獲取和分析的設置方法見表 1。
3 結果
SoftMax Pro 軟件中獲取及分析的設置可以在綠色和紅色熒光通道的透射光下簡便快速地分辨每個孔中的單球體。SoftMax Pro軟件還可計算所有通道包含的面積占比和物體面積 (μm2) (圖 3，表 2)。在綠色和紅色熒光通道下可以獲得最好的結果。對于 FUCCI 球體來說，圖 3 中紅色部分展示的是光滑圓潤的球體而綠色部分則在細胞表面，說明球體內部的細胞處在 G1 期而表面細胞即將進入 M 期。對應軟件可以分辨球體大小和形狀 ( 球形參數 ) 的各種變化，因此常用來研究多種處理，如抗癌藥物，對細胞增殖的影響 ( 圖4 )。MiniMax 中綠色和紅色熒光的光學成形功能可以將 3D 圖像轉換為 2D 投射球體圖。
四、高內涵檢測法
方法
1. 準備細胞懸液，40,000 細胞 / mL 的 Hela 細胞懸液與 30 顆粒 / 細胞濃度的 FUCCI 試劑混合，以 4,000 細胞 / 孔的濃度種在 96 孔板中，孔板置于 37 °C，5% CO2 的環境下貼壁 8 小時。
2. 不同濃度的有絲分裂抑制劑處理細胞，然后孔板放入 ImageXpress Micro 系統。
3. 每隔 2-3 小時系統自動拍攝一次圖片，使用 20 倍 Plan Apo 物鏡，同時獲取明場及兩個熒光通道 FITC 和 TRITC 的圖像。實驗持續 48 - 72 小時，細胞可完成 1 - 2 次分裂。
4. 分析延遲實驗圖像使用 MetaXpress? 高內涵成像與分析軟件的用戶自定義模塊。
Premo? FUCCI 細胞周期指示劑結合配置環境控制的 ImageXpress Micro 高內涵成像系統和 MetaXpress 高內涵分析軟件，可實現高效的活細胞周期精確測量。高通量篩選技術可為科學家提供一個快速、自動的基于圖像定量分析細胞周期的方法，并能夠完整地記錄長時間內的細胞周期變化。另外，MetaXpress 軟件能夠在明場圖像識別細胞，避免了染料對活細胞的毒性。同一標準具有統計學意義的定量分析方法可評價多化合物在不同濃度對細胞周期影響的相關參數。