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  • 發布時間:2019-10-02 20:01 原文鏈接: 細胞培養中支原體污染的特點及檢驗

    支原體是一種大小介于細菌和病毒之間(最小直徑0.2um)并獨立生活的微生物。約有1%可通過濾菌器。支原體無細胞壁形態呈高度多形性。可為圓形、絲狀或梨形。

    支原體形態多變,在光境下不易看清內部結構。電鏡下觀察支原體膜為三層結構。其中心有電干密度大的密集顆粒群或絲狀的中心束。支原體多吸附或散在于細胞表面和細胞之間。橫斷面與細胞微絨毛相似,但微絨毛電子密度比支原體小,且中心無顆粒群 或中心束。

    支原體代謝需固醇類物質,部分種類需要精氨酸、O2或葡萄糖。每一種支原體都有自身特點,多數支原體適合于偏堿條件下生存(PH7.6-8.0),對酸耐受性差。對熱比較敏感,對一般抗生素不敏感。

    支原體污染細胞后,培養液可不發生混濁。多數情況下細胞病理變化稍微或不顯著,細微變化也可由于傳代、換液而緩解,因此易被忽視。但個別嚴重者,可致細胞增殖緩慢,甚至從培養器皿脫落。

    為確定有無支原體污染可做如下檢測:

    1.相差顯微境檢測

    將細胞按種于事先放置于培養瓶內的蓋玻片上,24h后取出,用相差油鏡觀察,支原體呈暗色微小顆粒位于細胞表面和細胞之間。

    2.熒光染色法

    熒光染色用能與DNA特異性結合的熒光染料Hoechst 33258,可使支原體內含有的DNA著色,染色后用熒光顯微鏡觀察。具體方法如下:首先將細胞接種蓋玻片上,在細胞未長滿前取出玻片,用不合酚紅的 Hanks液漂洗一下,用l: 3醋酸甲酵固定10Min,然后用生理鹽水漂洗,置于用生理鹽水配濃度為50pg/ml的Hoechst 33258中染色10min。染色后用蒸溜水洗1-2min,向細胞面滴加pH5.5磷酸緩沖液數滴,然后置熒光顯微鏡下觀察。鏡下支原體為散在于細胞同圍或附于細胞膜表面的亮綠色小點。

    3.電鏡檢查

    用掃描電鏡方法簡便快速,也可以利用透射電鏡。

    4.DNA分子條文檢查或支原體培養等方法

    檢出率高,但方法較為復雜。

    支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物,大小一般在0.3-0.5μm之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態。它不同于細胞,也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色,用姬姆薩染色很淺,革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養中生長,營養要求比細菌高。



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