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  • 發布時間:2022-03-19 21:05 原文鏈接: 細胞培養技術的生存期的相碰介紹

      “ 一代”指細胞接種到分離再培養的所用的時間。與細胞倍增一代不是一個含義。在細胞一代中,細胞能倍增3~6次,經歷三個階段:

      1. 潛伏期(latent phase) :

      接種 經過 懸浮期(細胞質回縮,胞體呈圓球形) 貼壁。

      初代培養細胞 經過 10~24小時或更多時間。

      連續細胞系和癌細胞系 經過 10~30分鐘 貼附。

      貼附現象是一個非常復雜和受多種因素的影響。

      影響細胞貼附:底物表面不干凈,影響細胞貼附。

      利于細胞貼附:底物表面帶有陽性物質與特殊物質:

      纖粘連蛋白(fibronectin FN)、

      細胞表面蛋白(cell surface proteinCSP)

      這些物質有的存在與細胞表面,有的來自血清。

      潛伏期特點:

      長短與細胞接種密度、種類、使用的培養基性質有關。

      (1)細胞貼附后進入潛伏期,細胞無增殖。少見分裂相,細胞有運動活動。

      (2)初代培養 細胞潛伏期約為24~96小時或更長,

      連續細胞系和腫瘤細胞潛伏期約6~24小時。

      (3)細胞接種密度大潛伏期短。

      (4)細胞出現分裂相增多時,標志細胞進入指數增生期。

      2.指數增生期(logarithmic growth phase):

      特點:細胞增殖最旺盛階段,分裂相增多。

      細胞分裂指數(mitotie index MI) :

      表示每1000個細胞中的分裂相數。

      條件:分裂相數與細胞種類、培養成分、pH培養箱溫度有關。

      細胞分裂指數:

      初代細胞:在0.1%~0.5%之間% ,

      連續分裂細胞和腫瘤細胞:3 ~5%。

      指數增生期是作為細胞一代活力最好的時期,是進行實驗最好和最主要的階段。

      指數增生期持續3~5天,細胞數量增多后生長空間變小,細胞相互接觸可連接成片。

      正常細胞:細胞相互接觸能抑制細胞運動,這種現象稱為接觸抑制(contact inhibition)。

      腫瘤細胞:沒有這種現象,可作為區別正常與腫瘤細胞的標志之一。當腫瘤細胞達到一定密度后向三維空間發展,使細胞發生堆積(piled up)。

      由于細胞不斷增殖分裂,細胞數量持續增多,培養液的營養成分減少,代謝產物增多,細胞受營養的枯竭和代謝物的影響,則發生密度抑制(Density inhibition),導致細胞分裂停止。

      3.停滯期(stagnate phase)

      細胞量和密度達到飽和,細胞停滯增殖。表明細胞進入到停滯期,細胞數量持平,也稱為平頂期(plateau)。

      特點:細胞不增殖,有代謝活動。培養液中的營養已逐漸耗盡,代謝產物積累增多,pH降低,此時需要傳代,否則細胞將會中毒,發生形態改變,細胞會從底物脫落死亡。

      注意:

      傳代過晚將影響下一代細胞的生長,至少要再傳 1~2代 ,通過換液淘汰死細胞和受損較輕的細胞。待細胞全部恢復后再用。

      在這一點上要特別注意。

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