“ 一代”指細胞接種到分離再培養的所用的時間。與細胞倍增一代不是一個含義。在細胞一代中,細胞能倍增3~6次,經歷三個階段:
1. 潛伏期(latent phase) :
接種 經過 懸浮期(細胞質回縮,胞體呈圓球形) 貼壁。
初代培養細胞 經過 10~24小時或更多時間。
連續細胞系和癌細胞系 經過 10~30分鐘 貼附。
貼附現象是一個非常復雜和受多種因素的影響。
影響細胞貼附:底物表面不干凈,影響細胞貼附。
利于細胞貼附:底物表面帶有陽性物質與特殊物質:
纖粘連蛋白(fibronectin FN)、
細胞表面蛋白(cell surface proteinCSP)
這些物質有的存在與細胞表面,有的來自血清。
潛伏期特點:
長短與細胞接種密度、種類、使用的培養基性質有關。
(1)細胞貼附后進入潛伏期,細胞無增殖。少見分裂相,細胞有運動活動。
(2)初代培養 細胞潛伏期約為24~96小時或更長,
連續細胞系和腫瘤細胞潛伏期約6~24小時。
(3)細胞接種密度大潛伏期短。
(4)細胞出現分裂相增多時,標志細胞進入指數增生期。
2.指數增生期(logarithmic growth phase):
特點:細胞增殖最旺盛階段,分裂相增多。
細胞分裂指數(mitotie index MI) :
表示每1000個細胞中的分裂相數。
條件:分裂相數與細胞種類、培養成分、pH培養箱溫度有關。
細胞分裂指數:
初代細胞:在0.1%~0.5%之間% ,
連續分裂細胞和腫瘤細胞:3 ~5%。
指數增生期是作為細胞一代活力最好的時期,是進行實驗最好和最主要的階段。
指數增生期持續3~5天,細胞數量增多后生長空間變小,細胞相互接觸可連接成片。
正常細胞:細胞相互接觸能抑制細胞運動,這種現象稱為接觸抑制(contact inhibition)。
腫瘤細胞:沒有這種現象,可作為區別正常與腫瘤細胞的標志之一。當腫瘤細胞達到一定密度后向三維空間發展,使細胞發生堆積(piled up)。
由于細胞不斷增殖分裂,細胞數量持續增多,培養液的營養成分減少,代謝產物增多,細胞受營養的枯竭和代謝物的影響,則發生密度抑制(Density inhibition),導致細胞分裂停止。
3.停滯期(stagnate phase)
細胞量和密度達到飽和,細胞停滯增殖。表明細胞進入到停滯期,細胞數量持平,也稱為平頂期(plateau)。
特點:細胞不增殖,有代謝活動。培養液中的營養已逐漸耗盡,代謝產物積累增多,pH降低,此時需要傳代,否則細胞將會中毒,發生形態改變,細胞會從底物脫落死亡。
注意:
傳代過晚將影響下一代細胞的生長,至少要再傳 1~2代 ,通過換液淘汰死細胞和受損較輕的細胞。待細胞全部恢復后再用。
在這一點上要特別注意。