Q5.明膠包被后的培養瓶使用期的問題
A5.這個我不知道，但基本上是越快使用越好。由於包被的過程很快，所以我都是當天包被， 在等的過程中可以去做其他的事，包被即將完成的前20分鐘就開始處理細胞，等細胞收下來包被也就做好了， 馬上就用。
0.1%的明膠適合大多數細胞培養時的包被，在四度放置不會出現凝膠狀。我參考的文獻說內皮細胞用1％的明膠包被，也就是母液，它在四度放置時會適度凝結。我的內皮細胞用1％的明膠包被效果我覺得還不錯。
不管你用包被1小時的方法還是包被4小時的方法，都最好從包被開始到使用的間隔不超過一天，包被的容器放置時間越長越不好。
(三)纖連蛋白（(Fibronectin， FN）包被：
因為課題需要，我要養人外周血來源內皮細胞，得先用human fibronectin包被培養板。但是昨晚我看了個通宵，把論壇里關于FN包被培養板的帖子大致瀏覽了一遍，反而越看越糊涂了——幾乎就是百家爭鳴的局面：
從稀釋融解開始，有人說不能用三蒸水，要用制藥用的純水，否則PH值不對會影響活力；有人說用PBS，有人說用加了尿素的PBS；母液的濃度一般說是1mg/ml，但是買來的FN一般就是1mg，按這個濃度配置母液只能得到1ml，這么小的量如何分裝啊？
至于包被的濃度，差異更是很大，有人說各個公司的產品不一樣，還是以說明書上說的為準，是不是這樣啊？
另外，包被的方法，有4度過夜的，有37度過夜的，有37度2至3個小時的，還有四度過夜或37度2至3個小時的……
我買的是ROCHE的1mg裝human fibronectin，用的是corning的24孔板，最后對各種方案進行了摸索，結果見下面的帖子。
剛剛又再看了一下濃度的問題，大致歸結為以下三種方案：
1.論壇里大部分戰友用的還是50微克/毫升的濃度，室溫或37度下放置30至40分鐘。
2.我請教了有的人用的是10微克/毫升，4度過夜。
3.還有我見一篇文獻《成人外周血內皮祖細胞分離和誘導分化》中南大學學報(醫學版)J Cent South Univ (M ed Sci) 2005， 30 (5)上面寫的是1微克/毫升，37度過夜。
至此產生一個疑問：是不是這幾種方案都可行？濃度越高的，需要的溫度就越低，時間就越短，而最后達到的效果是一樣的？
如果真是這樣，那么以上3個方案是一個比一個便宜啊，那我干脆用第3方案得了？第1方案比第3方案貴了五十倍啊！比第2方案也貴了五倍。
非得花那么多錢嗎？FN不便宜啊！
各位戰友，我摸索了好幾次，總共試驗了以下方案：
1.50ug/ml，4度過夜；
2.10ug/ml，4度過夜；
3.50ug/ml，室溫下放置45分鐘至一小時；
4.10ug/ml，37度過夜；
5.1ug/ml，37度過夜。
現在養到了第四天，自我感覺貼壁效果最好的是方案4，而且該方案所用的FN還是方案2用過一次的，我把它回收了又重復利用，已經經過了一次凍融，按理說效果應該下降了不少了，但是它的貼壁時間早，細胞多而且形態比較接近長梭形，還聚集形成了很多集落樣的結構，如下圖：
至于溶解分裝，我是用滅菌注射用水1ml將其溶解為1mg/ml，然后分裝為八支EP管，負二十度保存。