四、凍存及復蘇
為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度－196℃，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養基，以一定的冷卻速度凍存，最終保存于液氮中。在極低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的。復蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內迅速融解。然后將細胞轉入培養器皿中進行培養。
凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復蘇時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。
五、常用儀器設備
無菌室,超凈工作臺,三重純水蒸餾器,抽氣泵,壓力蒸氣消毒器,電熱恒溫培養箱,培養器具，CO2培養箱,恒溫水浴鍋,倒置顯微鏡,離心機,無菌過濾器,洗刷裝置,細胞計數板和電子細胞技術儀等等。
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第三節 細胞培養的無菌環境
一、無菌室
無菌室的結構：一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成。
無菌室的消毒和防污染：為保持無菌狀態，經常消毒是必要的，通常采用每日（使用前）紫外照射（1－2小時），每周甲醛、乳酸、過氧乙酸熏蒸（2小時）和每月新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進行消毒。實際工作中，要根據無菌室建筑材料的差異來選擇合適的消毒方法。
此外，還應注意防止無菌室的污染。造成無菌室污染的可能包括：送入無菌室的風沒有被過濾除菌；進出無菌室時，能使外界空氣直接對流進無菌室的操作間；等。
二、超凈工作臺
工作原理：鼓風機驅動空氣通過高效過濾器得以凈化，凈化的空氣被徐徐吹過臺面空間而將其中的塵埃、細菌甚至病毒顆粒帶走，使工作區構成無菌環境。根據氣流在超凈工作臺的流動方向不同，可將超凈工作臺分為側流式、直流式和外流式三種類型。
超凈臺的使用與保養：超凈臺的平均風速保持在0.32-0.48米/秒為宜，過大、過小均不利于保持凈化度；使用前最好開啟超凈臺內紫外燈照射10－30分鐘，然后讓超凈臺預工作 10－15分鐘，以除去臭氧和使用工作臺面空間呈凈化狀態；使用完畢后，要用70%酒精將臺面和臺內四周擦拭干凈，以保證超凈臺無菌。還要定期用福爾馬林熏蒸超凈臺。
第四節 常用培養器皿及清洗消毒
細胞培養需要大量消耗性物品，如玻璃器皿、金屬器皿、塑料、橡膠制品、布類、紙類等，因此掌握清洗、消毒知識，學會清洗、消毒方法是從事細胞培養工作必須的。
一、清洗 離體條件下，有害物質直接同細胞接觸，細胞對任何有害物質十分敏感，極少殘留物都可以對細胞產生毒副作用。因此，新的或重新使用的器皿都必須認真清洗，達到不含任何殘留物的要求。
（一）玻璃器皿的清洗 一般經過浸泡、刷洗、浸酸、和清洗四個步驟。
1.浸泡:新的或用過的玻璃器皿要先用清水浸泡，軟化和溶解附著物。新玻璃器皿使用前得先用自來水簡單刷洗，然后用5％鹽酸浸泡過夜；用過的玻璃器皿往往附有大量蛋白質和油脂，干涸后不易刷洗掉，故用后應立即浸入清水中備刷洗。
2.刷洗:將浸泡后的玻璃器皿放到洗滌劑水中，用軟毛刷反復刷洗。不要留死角，并防止破壞器皿表面的光潔度。將刷洗干凈的玻璃器皿洗凈、晾干，備浸酸。
3.浸酸: 浸酸是將上述器皿浸泡到清潔液中，又稱酸液，通過酸液的強氧化作用清除器皿表面的可能殘留物質。浸酸不應少于六小時，一般過夜或更長。放取器皿要小心。
4.沖洗:刷洗和浸酸后的器皿都必須用水充分沖洗，浸酸后器皿是否沖洗的干凈，直接影響到細胞培養的成敗。手工洗滌浸酸后的器皿，每件器皿至少要反復“注水－倒空”15次以上，最后用重蒸水浸洗2－3次，晾干或烘干后包裝備用。
（二）橡膠制品清洗
新的橡膠制品洗滌方法：0.5mol/L NaOH煮沸15分鐘，流水沖洗，0.5mol/L HCl煮沸15分鐘，流水沖洗，自來水煮沸2次，蒸餾水煮沸20分鐘，50℃烤干備用。