外泌體——是一類有細胞釋放的細胞外囊泡。外泌體的特點見正文。
細胞外囊泡——簡稱EV，是由細胞釋放的各種具有膜結構的囊泡結構統稱，這些囊泡的直徑可以從30、40nm到8、9um。細胞外囊泡有不同的亞群，而目前研究最火熱的是外泌體這個亞群。
然而由于目前很難純化到非常純的外泌體亞群，人們純化到的通常是直徑小于200nm的囊泡，因此越來越多的人開始稱之為sEV（即 small extracellular vesicle，小細胞外囊泡）。為了嚴謹，所以今天我們也以細胞外囊泡來稱呼這些膜泡結構。本文中沒有特殊說明的情況下，細胞外囊泡主要指外泌體和微囊泡。
今天主要介紹內容包括細胞外囊泡的研究意義、細胞外囊泡的分類、細胞外囊泡含有的成分、細胞培養上清的制備、細胞外囊泡的保存、細胞外囊泡的鑒定實驗要求。所有內容都參考目前已發表的綜述，并非hzangs杜撰。所以請新朋友們放心學習。
細胞外囊泡的研究意義
目前，細胞外囊泡的功能還沒有完全闡明。已有的報道認為它們能夠調節宿主-病原體的相互作用，參與傳染性和炎性疾、神經疾病和癌癥等很多種疾病的病理過程，同時在正常的生理過程中也發揮著介導細胞間通訊的重要功能，已有文章報道細胞外囊泡在發育中也發揮著重要作用。細胞外囊泡在臨床醫學中也有十分光明的應用前景，主要是因為它們含有豐富的生物標志物，可用于監測臨床狀態，治療反應，疾病進展等，同時由于它們具有遞送生物分子的功能，因此它們還有發展成臨床藥物遞送載體的潛力。
細胞外囊泡的分類
細胞外囊泡—這個詞是由國際細胞外囊泡學會（ISEV）創造的術語，根據細胞外囊泡的生物合成或釋放途徑可以對囊泡進行分類：外泌體（exosomes）直徑為30-150nm，起源于內吞途徑，其密度約為1.11-1.19g mL-1；微粒/微囊泡（microparticles/microvesicles）直接從質膜釋放，直徑約100-1000nm；凋亡小體（apoptotic body/bleb）直徑約為50nm-2μm，由細胞凋亡產生；腫瘤小泡（large oncosomes）直徑約1-10μm，由腫瘤細胞釋放產生；以及其他各種EV亞群。由于不同EV亞群的大小以及它們的所包含的生物分子存在差異，因此現在已經有幾個小組開始表征EV亞群的組成。最近的論文聲稱，基于一般表面蛋白質組學分析或個別EV群體的轉錄譜，對細胞外囊泡進行了成功的亞群分類。目前可以通過差速離心、過濾、免疫親和、層析、流式細胞分選、密度梯度離心選取不同密度區域等多種手段大致分離不同的細胞外囊泡亞群，但是這些方法都不能完全純化到特定的亞群，分離到的通常是富集了某一個亞群同時帶有其他細胞外囊泡亞群。
細胞外囊泡含有的成分
細胞外囊泡的組成成分并不是隨機的，每一個細胞外囊泡都會攜帶特定的分子信息。 實際上，這些納米尺寸的細胞外囊泡能夠攜帶蛋白質，脂質，核酸和糖等生物活性分子在細胞間傳遞信號，并且其包裝的獨特分子構成決定了要傳遞給受體細胞的細胞外信號的類型。有一個復雜的分選系統來決定那些分子能夠進入細胞外囊泡。
細胞培養上清的制備
目前有兩個策略來制備細胞培養上清用于提取細胞外囊泡。使用去除細胞外囊泡的胎牛血清（FBS）培養基培養細胞和使用不含FBS的培養基培養細胞（血清饑餓細胞）。但是目前一些高水平的文章報道使用的方法通常是前者。另外，有些文章開始關注去除細胞外囊泡的胎牛血清中游離RNA對實驗結果的影響，但是目前并沒有形成共識。如果需要先儲存培養上清，一定量后再用于細胞外囊泡分離，那需要預先去除體系中的死細胞和細胞碎片。
細胞外囊泡的保存
L?rincz等人曾對中性粒細胞來源的細胞外囊泡做了不同條件的儲存，之后再去分析這些囊泡的特性，他們發現雖然細胞外囊泡樣品中囊泡數量和形態沒有明顯變化，但即使是儲存在-20或-80攝氏度情況下的細胞外囊泡也存在磷酯酰絲氨酸外翻明顯增多的情況；但他們同時也發現，尿液來源的細胞外囊泡并沒有這些變化。Kalra等人分離了來自結直腸癌細胞的細胞外囊泡，不同條件保存一定時間后進行PKH67染色跟蹤細胞外囊泡的攝取，分析發現這些囊泡依舊可以被細胞攝取。就目前的情況，學者們并未就儲存條件對細胞外囊泡是否有影響達成共識。因此建議大家實驗時分離細胞外囊泡后盡快用于實驗，盡量減少儲存過程。
細胞外囊泡的鑒定及實驗要求
根據國際細胞外囊泡協會于2014年發表的一個指導手冊（MISEV），鑒定外泌體首先需要通過WB來鑒定細胞外囊泡的標志蛋白是否存在于樣品中，通過電子顯微鏡來觀察樣品中細胞外囊泡的形態特征，通過NTA等手段來分析樣品中細胞外囊泡的群體特征（粒子濃度、直徑分布等）。
今天就先介紹到這里。細胞外囊泡領域作為生物學研究中的一個新興領域越來越受到學者和生物公司的關注，也有越來越多的研究報道出現。但是我們也要清楚的認識到該領域的研究技術依舊不完善，對細胞外囊泡的認識依舊不充分，細胞外囊泡研究依舊處于一個起始階段，要走的路還很長。