細胞有絲分裂的實驗操作步驟

細胞有絲割裂指數(mitotic index，MI)是指歸于割裂期的細胞占總細胞數的百分率．用于表明細胞增殖旺盛的程度，也可用于檢查藥物對細胞增殖能力的影響。用蓋玻片培育法培育細胞，做固定和染色后，鏡下調查和計數1000個細胞中處于割裂期的細胞數并核算MI。

(一)材料

1．待檢資料(藥物)。

2．細胞培育成層的貼壁細胞。

3．試劑 甲醇、3％吉姆薩染液。

4．器材CO2培育箱、倒置顯微鏡、蓋玻片(2．2 cm×2．2 cm，需預先清潔和滅菌處理)、塑料培育皿(3．5 cm)、載玻片、封片用蓋玻片、中性樹膠。

(二)試驗辦法

1．將細胞消化成單個細胞懸液，將細胞懸液分瓶培育，分紅不加藥的對照組和加人不一樣劑量藥物的試驗組。

2．細胞傳代培育的辦法培育細胞，并制成濃度為105／ml的細胞懸液。

3．將清潔和滅菌處理的蓋玻片放置在塑料培育皿中，將細胞懸液搖勻后接種于培育皿中，各皿中接種量一樣。

4．別離于培育24 h、48ht和72h后從培育皿中取出蓋玻片，在Hanks液中漂洗2～3次。

5．先用甲醇固定30 min，再用吉姆薩染液染色。曬干后用中性樹膠封片。

6．油鏡下或高倍鏡下計數1000個細胞中處于割裂期的細胞數。

7．核算MI按下列公式核算MI。

(三)成果與分析

將對照組和藥物組的試驗成果繪制成直方圖并加以比較，也可繪制成MI曲線進行比較：

(四)注意事項

1．為了削減誤差，試驗者有必要了解各期割裂象細胞的形狀特征，該試驗從頭到尾最好由一人完結，當兩人以上調查時，應把握一樣的標準。

2．MI曲線與細胞生長曲線趨勢根本相似，但不徹底一樣。如果在細胞增長達飽和密壁并進入中止期后．細胞數量許多，而割裂象細胞可徹底消失。

3．細胞在蓋玻片上的密度常不均勻，細胞密集區與稀疏區的割裂象細胞數目也許不一樣。計數時要挑選密度近似區，以削減試驗誤差。