細胞核的分級分離實驗

小白鼠                                                          

蔗糖                                                                  氯化鈣溶液                                                                  甲苯胺蘭染液                                                                  詹納斯綠B染液                                                                  NaCl溶液                                                          

玻璃勻漿器                                                                  離心機                                                                  天平                                                                  光學顯微鏡                                                                  載玻片                                                                  蓋玻片                                                                  離心管                                                                  滴管                                                                  量筒                                                                  燒杯                                                                  玻璃漏斗                                                                  解剖剪                                                                  鑷子                                                          

1.  用頸椎脫位的方法處死小白鼠后，迅速剖開腹部取出肝臟，剪成小塊（去除結締組織）盡快置于盛有0.9%NaCl的燒杯中，反復洗滌，盡量除去血污，用濾紙吸去表面的液體。

2.  將濕重約1 g 的肝組織放在小平皿中，用量筒量取8 ml 預冷的0.25 mol/L 蔗糖-0.003 mol/L 氯化鈣溶液，先加少量該溶液于平皿中，盡量剪碎肝組織后，再全部加入。

3.  剪碎的肝組織倒入勻漿管中，使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中，左手持之，右手將勻漿搗桿垂直插入管中，上下轉動研磨3~5次，用3層紗布過濾勻漿液于離心管中，然后制備一張涂片①，做好標記，自然干燥。

4.  將裝有濾液的離心管配平后，放入普通離心機，以2500 rpm，離心15分鐘。

（1）緩緩取上清液，移入高速離心管中，保存于有冰塊的燒杯中，待分離線粒體用。

（2）同時涂一張上清液片②做好標記，自然干燥。

（3）余下的沉淀物進行下一步驟。

5.  用6 ml 0.25 mol/L 蔗糖-0.003 mol/L 氯化鈣溶液懸浮沉淀物，以2500 rpm 離心15分鐘棄上清，將殘留液體用吸管吹打成懸液，滴一滴于干凈的載玻片上，涂片③，自然干燥。

6.  將①、②、③涂片用1%甲苯胺蘭染色后蓋片即可觀察。