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  • 發布時間:2020-08-17 18:05 原文鏈接: 細胞核的分級分離實驗

    實驗材料 小白鼠

    試劑、試劑盒 蔗糖氯化鈣溶液甲苯胺蘭染液詹納斯綠B染液NaCl溶液

    儀器、耗材 玻璃勻漿器離心機天平光學顯微鏡載玻片蓋玻片離心管滴管量筒燒杯玻璃漏斗解剖剪鑷子

    實驗步驟

    1.  用頸椎脫位的方法處死小白鼠后,迅速剖開腹部取出肝臟,剪成小塊(去除結締組織)盡快置于盛有0.9%NaCl的燒杯中,反復洗滌,盡量除去血污,用濾紙吸去表面的液體。

     

    2.  將濕重約1 g 的肝組織放在小平皿中,用量筒量取8 ml 預冷的0.25 mol/L 蔗糖-0.003 mol/L 氯化鈣溶液,先加少量該溶液于平皿中,盡量剪碎肝組織后,再全部加入。

     

    3.  剪碎的肝組織倒入勻漿管中,使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中,左手持之,右手將勻漿搗桿垂直插入管中,上下轉動研磨3~5次,用3層紗布過濾勻漿液于離心管中,然后制備一張涂片①,做好標記,自然干燥。

     

    4.  將裝有濾液的離心管配平后,放入普通離心機,以2500 rpm,離心15分鐘。


    (1)緩緩取上清液,移入高速離心管中,保存于有冰塊的燒杯中,待分離線粒體用。


    (2)同時涂一張上清液片②做好標記,自然干燥。


    (3)余下的沉淀物進行下一步驟。

     

    5.  用6 ml 0.25 mol/L 蔗糖-0.003 mol/L 氯化鈣溶液懸浮沉淀物,以2500 rpm 離心15分鐘棄上清,將殘留液體用吸管吹打成懸液,滴一滴于干凈的載玻片上,涂片③,自然干燥。

     

    6.  將①、②、③涂片用1%甲苯胺蘭染色后蓋片即可觀察。


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