【爬片的準備】
1. 爬片：
24*24蓋玻片，剛好用于6孔板。也可用更大的蓋玻片，放在大的培養皿中爬片。
2. 蓋玻片泡酸過夜，第二天先用自來水沖洗20遍，再置于無水酒清中浸泡6小時，再用三
蒸水沖洗3遍（個人認為主要目的是將酸沖洗干凈就可以了，如果不干凈的話，細胞帖壁不
好），放在飯盒或者玻璃培養皿中烘干后進行高壓消毒、烤干。
3．蓋玻片浸泡75%乙醇10分鐘消毒，然后酒精燈上烤干，直接放入培養皿，開始種細胞。重點是玻片是干凈的、無菌的。
4.蓋玻片在液體中經常有貼壁吸附力，用一般鑷子很難一次性夾起，將注射器針頭針尖
向背面弄個小鉤，這樣將爬片輕輕勾起，用小鑷子取出就可以。
【細胞爬片】
1. 胰酶消化細胞后計數重懸細胞于完全培養基中。
2. 加細胞時，根據玻片的大小，先在每個孔里準備放爬片的位置滴少量培養基，目的是使
玻片與培養皿靠培養基的張力粘合到一起，然后放玻片，防止加細胞懸液時玻片漂起，造成雙層細胞貼片。整個過程注意無菌操作。
3. 根據自己的需要選擇合適的細胞密度種入培養板內即可
4. 按照實驗設計，作用一定時間后取玻片。注意細胞不能太密，否則容易掉片。
【細胞爬片的固定】
1. 細胞爬片取出后，PBS洗2遍。但比如做凋亡的TUNEL染色時就避免洗，因為凋亡的
細胞在洗的過程中有可能會脫落。
2.常用的固定液
1.） 冷丙酮，可用于一般的免疫組化染色。將純的丙酮預先放入冰箱-20℃后便為冷丙酮，加入冷丙酮于-20℃（丙酮有很強的揮發性，注意將含有丙酮和爬片的器皿蓋嚴，防止其揮發）固定10分鐘。取出后，室溫吹干，然后放入-20℃保存。
2. ）多聚甲醛(常用4%)：可用于免疫電鏡；也可用于免疫熒光以及TUNEL染色。主要檢測組織內一些性能嬌弱的抗原特別是細胞表面抗原，例如各類淋巴細胸分化決定簇(CD)、主要組織相容性抗原等室溫固定15分鐘后，將表面液體吹干，入-20℃保存
3.） 95％乙醇，可用于免疫組化。
優點：穿透性強、抗原性保存較好。
缺點：但醇類對低分子蛋白質、多肽及胞漿內蛋白質保存效果較差，使蛋白變性的作用輕，固定后可再溶解；染色過程中，溫育時間長，抗原可流失而減弱反應強度室溫固定
15分鐘后，將表面液體吹干，入-20℃保存
4. ）甲醛(福爾馬林)應用最廣
優點：形態結構保存好，且穿透性強，
缺點：甲醛放置過久可氧化為甲酸，使溶液pH降低，影響染色；分子間交聯形成的網格
結構可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露。可造成假陰性的染色結果。室溫固定15分鐘后，將表面液體吹干，入-20℃保存。
【細胞爬片的組化染色】
1. PBS清洗標本 3次各2 min。
2. 0.5%Triton X-100( DPBS配) 孵育 1次20min。（此步驟用于胞漿、胞核抗原）
3. PBS清洗標本3次各 2 min。
4. 3%H2O2孵育 15 min。
5. 余下步驟同石蠟切片組化染色。