有些有機溶劑(如苯、甲苯)、抗生素、表面活性劑(SDS、Triton X-100)、金屬整合劑(EDTA) 、變性劑(鹽酸胍、脲)等化學藥品都可以改變細胞壁或膜的通透性,使內含物有選擇地滲透出來。這種處理方式就是化學滲透法。本文僅以表面活性劑 Triton X-100 為例簡要介紹如下。
溶解培養的動物細胞
緩沖鹽液TBS
試管
1. 用緩沖鹽液(TBS:10 mmol/L pH7.5 Tris-HCl,150 mmol/L NaCl) 4℃:洗細胞幾次;
2. 離心除去緩沖鹽液,在 含 0.1 %~0.3 % Triton X-100 的緩沖鹽液(TBS) 中混懸細胞(107~ 108 細胞/ml 或總蛋白 3 ~ 4 mg/ml);
3. 混旋或顛倒試管幾次后,冰浴中孵育 10 ~60 min。
1. 低濃度表面活性劑處理。如能充分溶解細胞,則它是很溫和的方法。
2. 若目的蛋白不穩定,冰浴中孵育時間可以減少甚至取消;裂解液內加入 0.2 倍體積 50% 甘油也可以穩定目的蛋白。
3. Triton X-100 以外的表面活性劑也可以用。
4. 此法主要用于溶解培養的動物細胞。