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  • 發布時間:2019-03-28 22:44 原文鏈接: 細胞破碎和蛋白質溶解實驗_?化學滲透法

    實驗方法原理

    有些有機溶劑(如苯、甲苯)、抗生素、表面活性劑(SDS、Triton X-100)、金屬整合劑(EDTA) 、變性劑(鹽酸胍、脲)等化學藥品都可以改變細胞壁或膜的通透性,使內含物有選擇地滲透出來。這種處理方式就是化學滲透法。本文僅以表面活性劑 Triton X-100 為例簡要介紹如下。

    實驗材料

    溶解培養的動物細胞

    試劑、試劑盒

    緩沖鹽液TBS

    儀器、耗材

    試管

    實驗步驟

    1. 用緩沖鹽液(TBS:10 mmol/L pH7.5 Tris-HCl,150 mmol/L NaCl) 4℃:洗細胞幾次;


    2. 離心除去緩沖鹽液,在 含 0.1 %~0.3 % Triton X-100 的緩沖鹽液(TBS) 中混懸細胞(107~ 108 細胞/ml 或總蛋白 3 ~ 4 mg/ml);


    3. 混旋或顛倒試管幾次后,冰浴中孵育 10 ~60 min。

    注意事項

    1. 低濃度表面活性劑處理。如能充分溶解細胞,則它是很溫和的方法。


    2. 若目的蛋白不穩定,冰浴中孵育時間可以減少甚至取消;裂解液內加入 0.2 倍體積 50% 甘油也可以穩定目的蛋白。


    3. Triton X-100 以外的表面活性劑也可以用。


    4. 此法主要用于溶解培養的動物細胞。

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