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  • 發布時間:2019-03-28 22:43 原文鏈接: 細胞破碎和蛋白質溶解實驗_?酶溶法



    實驗方法原理酶溶法就是用生物酶將細胞壁和細胞膜消化溶解的方法。因此利用此方法處理細胞必須根據細胞的結構和化學組成選擇適當的酶。常用的有溶菌酶、β-1,3-葡聚糖酶、β-1,6-葡聚糖酶、蛋白酶、甘露糖酶、糖苷酶、肽鏈內切酶、殼多糖酶等、細菌主要用溶菌酶處理,酵母需要用幾種酶進行復合處理。使用溶酶系統時要注意控制溫度、酸堿度、酶用量、先后次序及時間。這里僅以溶菌酶處理大腸桿菌為例,介紹具體體方法如下。
    實驗材料

    大腸桿菌

    試劑、試劑盒

    溶菌酶緩沖液

    實驗步驟

    1. 混懸洗過的大腸桿菌于 TE 緩沖液內,每克細菌需 3 ml 緩沖液。調整溫度至 20℃~37℃;


    2. 每 5 ml 混懸液加入1 mg 溶菌酶,可以從新配制 10 mg/ml 的母液吸取或直接用酶的凍干粉;


    3. 在 20℃~37℃ 溫育 10~20 min,同時輕輕搖動。

    注意事項

    1. 增加溶菌酶的濃度,如高達 10 mg/ml,能更快的溶解細菌,用更高的濃度甚至在 4℃ 作用 5 min 即可獲得滿意的溶解。


    2. 雖然酶溶法有選擇性釋放產物、核酸泄出量少、細胞外形完整等優點,但它也存在明顯不足:如酶價格高、通用性差、有時存在產物抑制。


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